本發(fā)明公開了一種分泌抗萊克多巴胺單克隆抗體的雜交瘤細胞株及其應用。所述雜交瘤細胞株命名為雜交瘤細胞株G?1?5，保藏編號為CGMCC No.16689。本發(fā)明利用自行設計的萊克多巴胺人工抗原免疫小鼠，利用免疫的小鼠脾細胞制備獲得雜交瘤細胞株，該雜交瘤細胞株分泌的抗萊克多巴胺單克隆抗體，效價高，特異性強，可用于對萊克多巴胺進行快速、準確的免疫檢測和免疫分析。

技術領域

本發(fā)明屬于生物技術領域，具體涉及一種分泌抗萊克多巴胺單克隆抗體的雜交瘤細胞株及其應用，其特別適于動物組織、動物尿液、動物血清、飼料等樣本中萊克多巴胺殘留量的檢測。

背景技術

萊克多巴胺(Clebuterol)屬于β-受體激動劑，具有重新分配機體營養(yǎng)、抑制脂肪沉積、提高蛋白質含量、增加酮體瘦肉率、改善肉質以及促進動物生長的作用。然而，在經濟利益的驅使下，大量萊克多巴胺被濫用于畜牧業(yè)和養(yǎng)殖業(yè)。人體攝入過量萊克多巴胺時，會導致一系列不良反應，主要有肌肉震顫、心跳和呼吸加快等，甚至會危害生命。因此，許多國家已經禁止將萊克多巴胺作為飼料及飼料添加劑使用，我國農業(yè)部也于2002年明確將其列入《禁止在飼料和動物飲用水中使用的藥物品種目錄》。

目前，檢測萊克多巴胺比較經典的方法有高效液相色譜-質譜聯(lián)用法(HPLC-MS)、氣相色譜-質譜聯(lián)用法(GC-MS)、高效液相色譜法(HPLC)，這些都是比較傳統(tǒng)的方法，也是目前的確證方法。基層實驗室大批量檢測樣本應用的一般是免疫方法，因此獲得一株具有特異性親和力的抗萊克多巴胺單克隆抗體雜交瘤細胞株是非常重要的。本發(fā)明制備出一種分泌萊克多巴胺單克隆抗體的雜交瘤細胞株，并將其應用于免疫產品，測定動物組織、動物尿液中萊克多巴胺藥物的殘留量，具有檢測限低、特異性強、操作簡便、檢測速度快、檢測成本低，非常容易推廣等優(yōu)點。

發(fā)明內容

本發(fā)明目的在于提供一株對萊克多巴胺具有特異性親和力的單克隆抗體雜交瘤細胞株的制備方法。

本發(fā)明提供一株萊克多巴胺單克隆抗體雜交瘤細胞株，由該細胞株制備的抗體對萊克多巴胺具有較好的親和力和檢測靈敏度，可以用來建立萊克多巴胺總量的免疫學檢測方法，包括酶聯(lián)免疫試劑盒、膠體金檢測試紙條、免疫親和柱等。

本發(fā)明的技術方案：一株萊克多巴胺單克隆抗體雜交瘤細胞株，其命名為G-1-5，已保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC No.16689。

萊克多巴胺單克隆抗體，它由所述保藏編號為CGMCC No.16689的萊克多巴胺單克隆抗體雜交瘤細胞株G-1-5所分泌產生。

所述的萊克多巴胺單克隆抗體的應用，用于食品安全中萊克多巴胺含量的檢測。

本發(fā)明提供的細胞株G-1-5的制備步驟為：

(1)人工抗原的制備與鑒定：章胺和4-甲氧基-乙氧基-苯并戊酸甲酯反應，得到萊克多巴胺半抗原，半抗原與蛋白質偶聯(lián)，制備出人工抗原，即免疫原、包被原；

(2)單克隆抗體的制備：通過免疫小鼠，得到單克隆抗體；

(3)細胞株G-1-5的制備：通過細胞融合和克隆化，得到萊克多巴胺單克隆抗體雜交瘤細胞株G-1-5。

(4)細胞株G-1-5的應用：應用于酶聯(lián)免疫試劑盒。

(5)細胞株G-1-5的應用：應用于膠體金免疫層析試紙條。

(6)細胞株G-1-5的應用：應用于化學發(fā)光免疫檢測試劑盒、免疫磁珠分離富集試劑盒、磁顆粒化學發(fā)光試劑盒、時間分辨熒光免疫層析試紙條、熒光微球免疫層析試紙條、免疫親和柱等其他免疫檢測產品。

附圖說明

圖1：萊克多巴胺半抗原合成路線圖

具體實施方式