[發明專利]一種基于CD19和PSMA的雙重嵌合抗原受體基因修飾的免疫細胞及其應用在審
| 申請號： | 201811458426.6 | 申請日： | 2018-11-30 |
| 公開（公告）號： | CN109468284A | 公開（公告）日： | 2019-03-15 |
| 發明（設計）人： | 章睿 | 申請（專利權）人： | 北京美康基免生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N5/10 | 分類號： | C12N5/10;C12N15/867;C12N7/01;C07K16/28;C07K16/30;A61K35/17;A61P35/00;A61P35/02 |
| 代理公司： | 北京品源專利代理有限公司 11332 | 代理人： | 鞏克棟 |
| 地址： | 100085 北京*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 嵌合抗原 抗原受體 雙重嵌合 基因修飾 免疫細胞 抗原結合結構域 信號傳導結構 腫瘤表面抗原 共刺激信號 跨膜結構域 融合結構域 抗原靶向 治療效果 傳導區 串聯 應用 誘導 自殺 緩解 疾病 | ||
1.一種基于CD19和PSMA的雙重嵌合抗原受體基因修飾的免疫細胞，其特征在于，所述雙重嵌合抗原受體包括嵌合抗原受體CD19和嵌合抗原受體PSMA。
2.根據權利要求1所述的免疫細胞，其特征在于，所述嵌合抗原受體包括抗原結合結構域、跨膜結構域、共刺激信號傳導區、CD3ζ信號傳導結構域和可誘導自殺融合結構域串聯而成；
優選地，所述抗原結合結構域為針對腫瘤表面抗原CD19的單鏈抗體和針對腫瘤表面抗原PSMA的單鏈抗體。
3.根據權利要求1或2所述的免疫細胞，其特征在于，所述針對腫瘤表面抗原CD19的單鏈抗體的氨基酸序列具有(I)、(II)或(III)所示的氨基酸序列中的任意一個：
(I)具有如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列；
(II)與SEQ ID NO.1所示氨基酸序列具有≥90％，優選≥95％，更優選≥98％，最優選≥99％同源性的氨基酸序列；
(III)與SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列經修飾、取代、缺失或添加一個或幾個氨基酸獲得的氨基酸序列；
所述氨基酸序列具有針對腫瘤表面抗原CD19的單鏈抗體的活性；
優選地，所述針對腫瘤表面抗原PSMA的單鏈抗體的氨基酸序列具有(I)、(II)或(III)所示的氨基酸序列中的任意一個：
(I)具有如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列；
(II)與SEQ ID NO.2所示氨基酸序列具有≥90％，優選≥95％，更優選≥98％，最優選≥99％同源性的氨基酸序列；
(III)與SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列經修飾、取代、缺失或添加一個或幾個氨基酸獲得的氨基酸序列；
所述氨基酸序列具有針對腫瘤表面抗原PSMA的單鏈抗體的活性。
4.根據權利要求1-3中任一項所述的免疫細胞，其特征在于，所述跨膜結構域為CD28跨膜結構域和/或CD8α跨膜結構域；
優選地，所述共刺激信號傳導區為CD28信號傳導結構域、CD27信號傳導結構域或CD137信號傳導結構域中的任意一種或至少兩種的組合；
優選地，所述可誘導自殺融合結構域為包含胱天蛋白酶9結構域；
優選地，所述胱天蛋白酶9結構域的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示；
優選地，所述可誘導自殺融合結構域通過2A序列與CD3ζ信號傳導結構域相串聯。
5.根據權利要求1-4中任一項所述的免疫細胞，其特征在于，所述嵌合抗原受體包括信號肽、抗原結合結構域、跨膜結構域、共刺激信號傳導區、CD3ζ信號傳導結構域、2A序列和可誘導自殺融合結構域串聯而成；
優選地，所述嵌合抗原受體為Secretory信號肽、CD19抗原結合結構域和/或PSMA抗原結合結構域、CD8α和/或CD28跨膜結構域、CD28信號傳導結構域、CD27信號傳導結構域、CD3ζ信號傳導結構域、2A序列和胱天蛋白酶9結構域串聯而成；
優選地，所述嵌合抗原受體CD19為Secretory-CD19scFv-CD28-CD27-CD3ζ-2A-FBKP.Casp9；所述嵌合抗原受體PSMA為Secretory-PSMA scFv-CD28-CD27-CD3ζ-2A-FBKP.Casp9；
優選地，所述嵌合抗原受體CD19的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示或與其具有90％以上同源性的氨基酸序列；
優選地，所述嵌合抗原受體PSMA的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示或與其具有90％以上同源性的氨基酸序列。
6.根據權利要求1-5中任一項所述的免疫細胞，其特征在于，所述雙重嵌合抗原受體通過其編碼的核酸序列轉染到T細胞中表達；
優選地，所述轉染的方式為通過病毒載體、真核表達質粒或mRNA序列中的任意一種或至少兩種的組合轉染到T細胞，優選為通過病毒載體轉染到T細胞；
優選地，所述病毒載體為慢病毒載體或逆轉錄病毒載體中的任意一種或至少兩種的組合，優選為慢病毒載體。
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