本發明提供一種穿膜肽，所述穿膜肽的氨基酸序列為：Arg?Arg?Lys?Lys?Trp?Trp。該穿膜肽能夠介導阿霉素遞送至細胞中。本發明的穿膜肽無毒無免疫原性。且多肽固相合成技術成熟，廉價易得，便于質量管控。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種穿膜肽以及該穿膜肽在介導阿霉素遞送中的應用。

背景技術

阿霉素是一種廣譜抗腫瘤抗生素，可抑制腫瘤細胞RNA和DNA的合成，對處于各種生長周期的腫瘤細胞都有殺滅作用。因為阿霉素具有很高的性價比，2015年全球阿霉素藥物銷售額就達到8.1億美元。然而阿霉素依然存在溶解度小，遞送效率低和器官毒性等一系列問題，故阿霉素的遞送體系和手段都亟待提高。

細胞穿膜肽(cell-penetrating peptides,CPPs)，簡稱穿膜肽，是一類能高效攜帶大分子物質進入細胞的短肽，在新型生物納米材料的設計中應用廣泛。部分穿膜肽確實可以不依賴經典的胞吞作用而實現直接遞送，同時又可以通過人工序列設計兼具靶向性和無毒性。所以藥物遞送過程中通過穿膜肽介導的直接遞送是最理想的。

發明內容

為了解決現有技術中存在的問題，本發明提供了一種穿膜肽，該穿膜肽能夠高效介導阿霉素遞送至細胞內。

本發明提供一種穿膜肽，所述穿膜肽的氨基酸序列為：Arg-Arg-Lys-Lys-Trp-Trp。

本發明提供上述穿膜肽在介導阿霉素遞送至細胞中的應用。

上述細胞優選為腫瘤細胞，最優選為宮頸癌、肝癌或肺癌細胞。

作為優選，所述穿膜肽既能與阿霉素非共價作用相互結合，又能介導阿霉素遞送至細胞中。

作為優選，所述穿膜肽介導阿霉素遞送為非疾病的診斷和治療目的。

本發明提供上述的穿膜肽在制備介導阿霉素遞送至細胞中的藥物中的應用。

本發明所述穿膜肽既能夠通過非共價作用負載阿霉素，又能高效介導阿霉素遞送至細胞內。

本發明與現有技術相比，該穿膜肽無毒無免疫原性。且多肽固相合成技術成熟，廉價易得，便于質量管控。

具體實施方式

以下的實施例便于更好地理解本發明，但并不限定本發明。下述實施例中的實驗方法，如無特殊說明，均為常規方法。下述實施例中所用的試驗材料，如無特殊說明，均為市售。

實施例1穿膜肽合成

1)活化樹脂：稱取1000mg Fmoc-Trp wang Resin，加入30mL DMF浸泡30min，使其充分溶脹。

2)脫保護：抽濾除去浸泡樹脂的30mL DMF，加入含質量百分比為20％哌啶的DMF溶液30mL，氮氣吹沸25min，然后抽濾除去，用10mL異丙醇和DMF交替洗滌樹脂三次，而后用茚三酮法檢測樹脂，樹脂應成黑色或紫色。

3)縮合反應：連接下一個氨基酸，稱取1.4mmol/g樹脂的Fmoc-氨基酸，以TBTU/HOBt/DIEA的30mL DMF為反應液，室溫下氮氣吹沸反應2h。反應后，用10mL異丙醇和DMF交替洗滌樹脂三次。檢測氨基。

4)重復步驟2)-3)過程：按多肽的順序自C端向N端延伸多肽。多肽序列為：Arg-Arg-Lys-Lys-Trp-Trp。

5)多肽切割：用氮氣將多肽-樹脂復合物吹干，按TFA/phenol/超純水/thioanisole/EDT/TIS(80/5/5/5/3/2)的比例配成30mL混和切割試劑。將肽樹脂置于圓底燒瓶中，加入切割液磁力攪拌2h，砂芯過濾器除去樹脂，濾液直接滴入冷凍乙醚中，5000r/min離心沉淀，凍干至恒重即得粗肽。