本發明公開了一種烏桕組培不定芽瓶外生根育苗的方法，包括以下步驟：1)取烏桕幼嫩葉片為外植體，經表面消毒后，切塊；2)將葉片切塊進行不定芽的誘導培養；3)將不定芽進行不定芽的繼代伸長培養；4)待不定芽長至2?4cm，并伴有2?6片葉子時，切下不定芽，清洗后進行瓶外不定根誘導預處理；5)將經不定根誘導預處理后的不定芽進行不定根的誘導和成苗培養，獲得烏桕再生植株。本發明的優點在于：本發明的方法具有取材方便、材料豐富，且能保持烏桕母本株系的優良性狀的優點；并且還簡化了整個繁育環節，縮短了育苗周期，節省了組培培養空間，為烏桕的工廠化繁殖提供了更可靠、操作性更強的技術依據。

技術領域

本發明屬于植物快繁技術領域，具體涉及一種烏桕組培不定芽瓶外生根育苗的方法。

背景技術

烏桕(Sapium sebiferum Roxb.)為大戟科烏桕多年生落葉喬木，是一種集油用、觀賞、水土保持及藥用等多用途于一身的樹種。烏桕為我國四大木本油料樹種之一，種子含油量高達55％，為制取生物柴油的理想原料。烏桕樹型優美，葉色秀麗，是一種集觀果、觀葉、觀型與一身的景觀樹種，在我國已經有1400年的栽培史。此外，烏桕還具有適應性強，分布廣，生長速度快等優勢，是荒山造林的理想樹種，具有較高的經濟和生態價值。

目前，烏桕的繁殖方式主要包括播種、扦插和和組織培養等，由于烏柏為異花授粉植物，種子高度雜合，通過播種育苗存在較大的遺傳變異性，不適于烏桕優良株系的繁殖。常規的扦插繁殖，雖可以實現對優良株系的繁殖，但由于繁殖速度慢，且繁殖受季節和母株限制等原因，很難滿足優良品種大規模推廣的需求。植物組織培養技術可在短期獲得大量的、遺傳背景一致的優良種苗，可滿足規?；炝謱蹊陜灹贾晗捣N苗的需求。目前，有關利用植物組培技術對烏桕植株進行繁育的研究已有很多報道，但主要集中在以種子實生苗和野外植株的莖段為外植體，直接以野外優良株系的葉片為外植體進行離體再生的研究鮮有報道普。此外，現有的烏桕組培繁育技術普遍存在繁育過程繁瑣、生產成本高、育苗周期長、占用室內空間大、移栽成活率低等問題。

發明內容

本發明所要解決的技術問題在于提供了一種周期短、成本低并且成活率高的烏桕組培不定芽瓶外生根育苗的方法。

本發明是通過以下技術方案解決上述技術問題的：

本發明以烏桕優良株系的當年生幼嫩葉片為外植體，通過瓶內不定芽誘導結合瓶外生根技術，開發一種能夠簡化烏桕組培繁育步驟、縮短生產周期、降低生產成本且能提高烏桕移栽成活率的高效繁育技術。具體方案包括如下步驟：

1)取野外烏桕當年生幼嫩葉片為外植體，經表面消毒后，切塊；

2)將步驟1)獲得的葉片切塊接種于誘導培養基中進行不定芽的誘導培養，產生不定芽；

3)將步驟2)產生的不定芽轉接于新鮮的誘導培養基中進行不定芽的繼代伸長培養；

4)待步驟3)中繼代伸長培養后的不定芽長至2-4cm，并伴有2-6片葉子時，切下不定芽，清洗后進行瓶外不定根誘導預處理；

5)將步驟4)中經不定根誘導預處理后的不定芽定植于營養基質中，進行不定根的誘導和成苗培養，獲得烏桕再生植株。

優選地，在步驟1)中，表面消毒的過程為將葉片剪去葉柄，于流水下沖洗20-30min，70％酒精擦拭后，置于無菌環境中，用無菌水沖洗2-3遍，70％酒精消毒20-30s，10％-20％過氧化氫溶液消毒2-4min，無菌水沖洗4-6遍。

優選地，在步驟1)中，切塊為切成(0.3-1.0)×(0.5-1.0)cm²大小的葉片切塊。

優選地，在步驟2)和3)中，誘導培養基為添加10-50mg/L VC、0.2-2.0mg/L2-ip、0.1-1.0mg/L ZT、0.02-0.5mg/L NAA、20-30g/L蔗糖和6.5-8.0g/L瓊脂的WPM培養基。