本發明公開了一種檢測新型鴨呼腸孤病毒抗體的間接ELISA檢測試劑盒，所述試劑盒包含包被有新型鴨呼腸孤病毒σC蛋白重組抗原的酶標板；所述新型鴨呼腸孤病毒σC蛋白重組抗原的制備方法如下：以保藏編號為CCTCC NO：V201843的鴨呼腸孤病毒的全基因序列為模板，利用引物對擴增得到σC基因片段，構建重組表達載體，通過原核表達系統表達鴨呼腸孤病毒σC蛋白重組抗原。本發明的間接ELISA檢測試劑盒可以對新爆發的以脾臟壞死為主要癥狀的新型鴨呼腸孤病毒抗體進行快速、有效的檢測，以監測鴨群中新型呼腸孤病毒的流行情況。

技術領域

本發明涉及生物制品技術領域，具體涉及一種導致鴨脾臟壞死的鴨呼腸孤病毒的間接ELISA檢測方法。

背景技術

禽呼腸孤病毒屬于呼腸孤病科（Reovirdae）正呼腸孤病毒屬（Orthoreovirus），可以引起禽類發生多種疾病，其臨床表現因病毒毒株、毒力或感染宿主的不同而有差異。

2017年起，我國山東、河北、河南及江蘇、安徽等地鴨大范圍爆發以脾壞死為主要癥狀的傳染性疾病，該病主要引起各個年齡階段鴨脾臟腫大、出血和壞死，導致種鴨產蛋和肉鴨食欲減退、消瘦，生長發育不良，脾臟出現數個程度不同的壞死灶，腫大、出血、邊緣增生。鴨料肉比升高，肉鴨出欄合格率顯著降低，對肉鴨以及種鴨養殖業造成嚴重經濟損失。

研究證實，這種以脾臟壞死為主要癥狀的高發病率鴨傳染病的病原為一種新型的鴨呼腸孤病毒，屬于新發傳染病，對該病毒的生物學特性、致病機制等的研究尚處于起步階段，目前仍缺少有效的疫苗免疫和預防控制措施，對于該新型病毒的血清學檢測方法目前也尚未有報道。

發明內容

針對上述現有技術，本發明的目的是提供一種導致鴨脾臟壞死的鴨呼腸孤病毒的間接ELISA檢測方法?？梢詫π卤l的以脾臟壞死為主要癥狀的新型鴨呼腸孤病毒的抗體進行快速、有效的檢測，以監測鴨群中新型鴨呼腸孤病毒的流行情況。

該新型鴨呼腸孤病毒的保藏編號為CCTCC NO：V201843，保藏單位為中國典型培養物保藏中心，保藏日期為2018年7月18日，保藏地址為中國武漢，武漢大學，分類命名為新型鴨呼腸孤病毒N-DRV-XT18株。

為實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

本發明的第一方面，提供一種檢測新型鴨呼腸孤病毒抗體的間接ELISA檢測試劑盒，所述間接ELISA檢測試劑盒包含包被有新型鴨呼腸孤病毒σC 蛋白重組抗原的酶標板；

所述新型鴨呼腸孤病毒σC 蛋白重組抗原的制備方法如下：

以保藏編號為CCTCC NO：V201843的新型鴨呼腸孤病毒的全基因序列為模板，利用引物對擴增得到σC 基因片段，構建重組表達載體，通過原核表達系統表達新型鴨呼腸孤病毒σC 蛋白重組抗原；

所述引物對包括：

上游引物σC-F:5^，- ATACGCCTGATACTTTCCCT -3^’；(SEQ ID NO.1)

下游引物σC-R:5^’- GCGCAATGAGAAGAGCTATTCATC -3^’。 (SEQ ID NO.2)

進一步的，將所述重組表達載體轉化至BL21(DE3)感受態細胞中，加入IPTG進行誘導表達；將表達產物經過變性和復性后，獲得純化的新型鴨呼腸孤病毒σC 蛋白重組抗原。

作為優選，所述新型鴨呼腸孤病毒σC 蛋白重組抗原的包被量為500ng/孔。

進一步的，所述間接ELISA檢測試劑盒還包含：酶標抗體、樣品稀釋液、洗滌液、陰性對照血清、陽性對照血清、底物顯色液A、B和終止液。

優選的，所述酶標抗體為酶標羊抗鴨抗體。