[發明專利]一種能特異性降解喹諾酮類抗生素的試劑有效
| 申請號: | 201810886027.3 | 申請日: | 2018-08-06 |
| 公開(公告)號: | CN109081451B | 公開(公告)日: | 2022-01-18 |
| 發明(設計)人: | 陳慶國;劉梅;鮑博;李晶晶;戚柳倩 | 申請(專利權)人: | 浙江海洋大學 |
| 主分類號: | C02F3/34 | 分類號: | C02F3/34;C02F101/30 |
| 代理公司: | 杭州杭誠專利事務所有限公司 33109 | 代理人: | 尉偉敏 |
| 地址: | 316100 浙江省舟山市普陀區普*** | 國省代碼: | 浙江;33 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | 一種 特異性 降解 喹諾酮類 抗生素 試劑 | ||
1.一種能特異性降解喹諾酮類抗生素的試劑,其特征在于,所述喹諾酮類抗生素包括諾氟沙星、恩諾沙星和氧氟 沙星中的一種或多種;所述試劑包括:微藻蛋白液和葉綠素鋅酸粉末,所述試劑的制備方法如下:
(1)葉綠素鋅酸的合成:微藻的藻體破碎后用丙酮萃取,得葉綠素,用NaOH溶液皂化,加入鹽酸溶液調pH,然后加入硫酸鋅溶液進行取代,溶液有葉綠素鋅酸析出,過濾并洗滌;
(2)葉綠素鋅酸的一次純化:過濾反應液,將濾液置于分液漏斗中,加入二氯甲烷反復萃取至萃取液為無色,然后對萃取液進行蒸發濃縮,得濃縮液;
(3)葉綠素鋅酸的二次純化:對濃縮液做薄層層析分離,通過凝膠成像儀觀察熒光;用柱層析分離濃縮液,柱層析的固定相為硅膠,流動相為正丁醇、甲醇及蒸餾水,層析后得到葉綠素鋅酸的溶液,經蒸發濃縮、干燥后得到淺黃色葉綠素鋅酸固體;
(4)小球藻蛋白液的提取:將微藻離心濃縮,然后用超聲破碎儀進行破碎,離心,取上清液即為粗蛋白液;
(5)蛋白液的純化:將粗蛋白液置于飽和硫酸銨溶液中,經層析柱純化,用氯化鈉緩沖液梯度洗脫;合并具有酶活的洗脫液,用磷酸緩沖溶液透析過夜,得純化后的蛋白液;
(6)試劑的復配:在蛋白液中加入表面活性劑和葉綠素鋅酸粉末,攪拌均勻后靜置,加入穩定劑,即得能特異性降解喹諾酮類抗生素的試劑。
2.如權利要求1所述的一種能特異性降解喹諾酮類抗生素的試劑,其特征在于:所述試劑中含有表面活性劑和穩定劑。
3.如權利要求1或2所述的一種能特異性降解喹諾酮類抗生素的試劑,其特征在于:所述表面活性劑為烷基硫酸鈉、烷基苯磺酸鈉、烷基磺酸鈉、脂肪酸鈉中的至少一種。
4.如權利要求1或2所述的一種能特異性降解喹諾酮類抗生素的試劑,其特征在于:所述穩定劑為10~12%甘油、2.0~2.3mM EDTA、0.5~0.6mM DTT的混合液,穩定劑的pH為7.6~7.8。
5.如權利要求1所述的一種能特異性降解喹諾酮類抗生素的試劑,其特征在于:步驟(1)中,所述NaOH溶液的摩爾濃度為0.5~2mol/L,在60~80℃條件下皂化1~2h,用摩爾濃度為1~3mol/L的鹽酸溶液調pH至2~3,硫酸鋅溶液的質量濃度為4~6g/L,在溫度為50~90℃條件下取代1~2h。
6.如權利要求1所述的一種能特異性降解喹諾酮類抗生素的試劑,其特征在于:步驟(3)中,所述流動相正丁醇、甲醇、蒸餾水的重量比為6~8:3~5:1。
7.如權利要求1所述的一種能特異性降解喹諾酮類抗生素的試劑,其特征在于:步驟(4)中,所述小球藻在2~4℃、6000~8000r/min的條件下離心8~10min,細胞破碎儀的功率為1.0~1.2kW,探頭振幅為35~38%,破碎時間為30~45min,破碎后所得液體于2~4℃、10000~13000r/min條件下離心15~20min。
8.如權利要求1所述的一種能特異性降解喹諾酮類抗生素的試劑,其特征在于:步驟(5)中,所述層析柱為DEAE Sepharose Fast Flow層析柱,氯化鈉濃度梯度范圍為100~700mmol/L,磷酸緩沖溶液的濃度為1.0~1.3mM、pH為7.4~7.6,透析溫度為0~4℃。
9.如權利要求1所述的一種能特異性降解喹諾酮類抗生素的試劑,其特征在于:步驟(6)中,所述表面活性劑和葉綠素鋅酸粉末的加入量分別為每20ml蛋白液中加入50~55mg和0.5~0.6g,靜置時間為30~45min。
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