本發明涉及干細胞培養技術領域，特別涉及一種臍帶間充質干細胞原代培養基及其原代培養方法。該原代培養基包括氨甲環酸、G?CSF、EGF和基礎培養基；臍帶間充質干細胞原代培養基中各組分的濃度為：氨甲環酸：500～15000mg/L；G?CSF：10～50ng/L；EGF：5～30ng/mL；基礎培養基：補足。本發明將氨甲環酸、G?CSF、EGF添加入基礎培養基，能縮短原代培養時間，效果好于常規培養基及添加單一因子的培養基；同時可以避免異源性物質的引入，具有更高的臨床安全性。

技術領域

本發明涉及干細胞培養技術領域，特別涉及一種臍帶間充質干細胞原代培養基及其原代培養方法。

背景技術

間充質干細胞(mesenchymal stem cells，MSCs)是具有高度自我更新能力和多向分化潛能的多能干細胞，廣泛存在于骨髓、脂肪、羊膜液、胎盤、臍帶血及臍帶組織中。臍帶間充質干細胞(UC-MSCs)是存在于臍帶華爾通膠(Wharton's jelly)和血管周圍組織中的一種干細胞，來源廣泛，便于取材，在體外易于分離擴增。

臍帶間充質干細胞比來源于胚胎、骨髓、脂肪以及其他組織的MSCs更具有優勢。首先，臍帶來源不受倫理爭議，并且成本較低；其次，hUC-MSCs不會引起畸胎瘤，并且具有抑癌性，由于hUC-MSCs還具有低免疫原性、免疫調節、基質支持、旁分泌、遷移和基因穩定性，故具有良好的臨床治療潛能。常用的臍帶原代分離方法有：組織塊貼壁培養法、臍帶勻漿膠原酶消化法與改良膠原酶消化法3種方法。

現有常規培養技術采用外源血清(如胎牛血清)促進臍帶間充質干細胞增殖雖然能達到增殖目的，但是原代培養費時較長，且外源血清其組成成份雖大部分已知，但還有一部分尚不清楚，且血清組成及含量常隨供血動物的性別、年齡、生理條件和營養條件不同而異。

因此，需要尋求一種可替代胎牛血清用于臍帶間充質干細胞的體外快速擴增方法。

發明內容

有鑒于此，本發明提供了一種臍帶間充質干細胞原代培養基及其原代培養方法。本發明將氨甲環酸、G-CSF、EGF添加入基礎培養基，能縮短原代培養時間，效果好于常規培養基及添加單一因子的培養基；同時可以避免異源性物質的引入，具有更高的臨床安全性。

為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：

本發明提供了一種臍帶間充質干細胞原代培養基，包括氨甲環酸、G-CSF、EGF和基礎培養基；臍帶間充質干細胞原代培養基中各組分的濃度為：

氨甲環酸：500～15000mg/L；

G-CSF：10～50ng/L；

EGF：5～30ng/mL；

基礎培養基：補足。

作為優選，臍帶間充質干細胞原代培養基中各組分的濃度為：

氨甲環酸：500～10000mg/L；

G-CSF：10～20ng/L；

EGF：10～20ng/mL；

基礎培養基：補足。

優選地，臍帶間充質干細胞原代培養基中各組分的濃度為：

氨甲環酸：10000mg/L；

G-CSF：10～20ng/L；

EGF：20ng/mL；

基礎培養基：補足。

更優選地，臍帶間充質干細胞原代培養基中各組分的濃度為：

氨甲環酸：10000mg/L；

G-CSF：10ng/L；