本發明涉及一種環狀RNA circ?GPC3及其檢測試劑與應用，屬于生物技術領域。本發明的環狀RNA circ?GPC3對應的cDNA序列如SEQ ID NO:1所示，所述環狀RNA circ?GPC3由GPC3母基因的第3個獨立外顯子反向拼接環化產生；本發明環狀RNA circ?GPC3的檢測引物如SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示；本發明環狀RNA circ?GPC3的檢測探針如SEQ ID NO:4所示，所述探針的5’端標記有熒光報告基團，3’端標記有熒光淬滅基團。本發明提供了一種新的環狀RNA分子—環狀RNA circ?GPC3，并以該環狀RNA circ?GPC3作為分子標志物診斷肝癌。本發明還設計針對環狀RNA circ?GPC3分子的熒光定量檢測引物及taqman探針，該探針和引物能很好的檢測生物體內的circ?GPC3表達情況，可以為肝癌的診斷提供一種基于環狀RNA檢測的方案。

技術領域

本發明涉及一種環狀RNA circ-GPC3及其檢測試劑與應用，具體涉及一種環狀RNAcirc-GPC3、其檢測引物和探針以及該環狀RNA circ-GPC3在肝癌診斷中的應用，屬于生物技術領域。

背景技術

環狀RNA(circRNA)是一類在生物體內存在的閉合的環狀RNA分子，具有多種生物學特性，而且是客觀大量存在的。環狀RNA由基因組DNA轉錄加工后反向拼接產生的一類新穎的核酸分子。對于環化RNA的具體功能機制尚未明確，但在生物體內環狀RNA可以多層次調控基因的表達，比如：環狀RNA可以通過海綿作用吸附miRNA，轉錄后調控基因表達；環狀RNA可以和RNA結合蛋白作用調控基因轉錄；環狀RNA可以和基因組DNA結合調控RNA的剪接；另外環狀RNA可以直接作為模板翻譯蛋白質發揮重要的生物學作用。

Glypican3(GPC3)是一種硫酸乙酰肝素糖蛋白，全長蛋白位于細胞膜上。人的GPC3基因位于X染色體長臂26.2區域，全長基因組DNA跨越450151bp；最長轉錄RNA變異體包含9個外顯子。GPC3的核酸及蛋白在肝、心、腦、脾、胃、小腸、大腸及胰腺等正常成人組織中均不表達或超微量表達，而在胎盤、胚胎肝、胚胎肺和胚胎腎中表達。1997年Hsu等報道GPC3mRNA在肝癌組織中特異性高表達，在非腫瘤性肝臟中不表達或極低表達。GPC3作為一種分泌型的糖基磷脂酰肌醇錨定膜蛋白，在原發性肝癌患者的血清中可以被檢測到，而在肝硬化、慢性肝炎以及正常人群的血清中則無法檢測到，GPC3的存在并不受到AFP的影響，在AFP陰性或陽性的肝癌患者的血清中均能夠檢測到GPC3的存在。GPC3基因和肝癌的發生發展有密切關系，研究認為GPC3是肝癌發生過程中的一個早期事件，參與調控肝癌的發展過程；GPC3可以與Wnt通途信號分子形成復合物，通過自分泌和旁分泌的方式來增加經典Wnt途徑中的信號分子的表達，促進肝癌細胞的生長。

然而，現有技術暫無關于環狀RNA circ-GPC3的研究。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術的不足之處而提供一種環狀RNA circ-GPC3及其檢測試劑與應用。

為實現上述目的，本發明采取的技術方案為：

第一方面，本發明提供了一種環狀RNA circ-GPC3，所述環狀RNA circ-GPC3對應的cDNA序列如SEQ ID NO:1所示，所述環狀RNA circ-GPC3由GPC3母基因的第3個獨立外顯子反向拼接環化產生。

本發明的環狀RNA circ-GPC3是申請人檢索環狀RNA數據庫circbase及設計反向擴增PCR引物，經過大量研究，在肝癌細胞系Huh7中識別鑒定的一個新型的環狀RNA分子。環狀RNA circ-GPC3是由GPC3基因的第3個獨立完整的外顯子首位相接連接而成的環狀RNA分子，申請人將其命名為circ-GPC3，成熟circ-GPC3序列的長度為695nt。

第二方面，本發明提供了上述環狀RNA circ-GPC3作為分子標志物在制備用于診斷肝癌的試劑盒中的應用。