本發明涉及一種馬源破傷風抗體。本發明選用無天然抗體且年齡、體重、健康狀態良好的馬匹，采用不同劑量的破傷風亞毒素片段或與破傷風類毒素混合抗原進行馬匹的免疫，獲得抗體。本發明的有益效果為：本發明利用破傷風毒素亞毒素具有的良好的免疫原性獲得馬源破傷風抗體，可無限放大生產、質量易控制、完全無毒性；本發明的抗體與用破傷風類毒素免疫之馬源破傷風抗體功效相當。

技術領域

本發明屬于免疫學技術領域，具體涉及破傷風亞毒素用來免疫馬匹,產生 馬源破傷風抗體。

背景技術

破傷風是一種嚴重的感染性疾病，病死率高達20％-40％。任何創傷都有發 生破傷風的可能。破傷風抗體是短期預防和治療破傷風的快速有效藥物，目前 市場上的破傷風治療藥物有破傷風馬抗毒素(TAT)和破傷風人免疫球蛋白 (TIG)。TIG是由乙型肝炎疫苗免疫后再經破傷風類毒素免疫的獻血員中采 集破傷風抗體效價高的血漿，經提取的特異性免疫球蛋白制劑。TIG使用時無 需皮試，可直接注射，但由于其屬于血液制品，存在感染丙肝、艾滋等傳染病 的潛在風險，而且受來源限制，產量較低，成本較高，市場上往往出現“一針 難求”的現象。發展中國家和不發達國家很難自己制備和購買TIG用于破傷風 的預防和治療。所以TAT治療破傷風感染在這兩類國家中比較容易實現，且在 將來的很長一段時間內仍會繼續在臨床應用。

TAT是由破傷風類毒素免疫馬所得的血漿，經胃酶消化后純化制成的液體 抗毒素免疫球蛋白制劑，含特異性抗體片段，具有中和破傷風毒素的作用。目 前TAT的制備中還存在一些問題：(1)在馬匹破傷風加強免疫疫時,由于破傷 風類毒素成分復雜，不易產生高特異性抗體；(2)類毒素還是存在一定的毒性， 經常高劑量的注射破傷風類毒素抗原后采血，使馬匹肝細胞逐漸發生變性壞死, 一般情況下免疫采血馬匹在第十程以后開始，肝臟腫大變性,變成“豆腐渣” 樣,最后肝臟邊緣破裂，導致馬匹死亡。因此，提高免疫抗原的質量，降低毒 性，對于生產成本的降低以及TAT的質量提高均具有重要意義。

破傷風類毒素(TT)是在有利于產毒的液體培養基中培養產毒的破傷風桿 菌，用過濾的方法收獲毒素，用甲醛脫毒制成的。雖然其免疫效果較好，但仍 存在一些問題：(1)破傷風梭菌可形成芽孢形式，毒性高，生產時有一定危險 性；(2)甲醛處理類毒素易造成污染殘留，免疫馬匹時易引起副反應；(3)化學 處理后的類毒素還可能發生毒性逆轉，對馬匹產生毒性。

發明內容

為了解決現有技術存在的長期大量使用破傷風類毒素為免疫原，在免疫馬 身上產生毒性副作用問題，本發明提供了一種馬源破傷風抗體，其具有免疫性 高、價格低、容易生產、無毒性等特點。

本發明的目的是提供一種馬源破傷風抗體。

根據本發明具體實施方式的一種馬源破傷風抗體，其采用以下步驟制備而 成：

(1)使用破傷風亞毒素、破傷風類毒素或破傷風亞毒素與破傷風類毒素的 混合物對馬匹進行基礎免疫；

(2)使用破傷風亞毒素、破傷風類毒素或破傷風亞毒素與破傷風類毒素的 混合物對基礎免疫后的馬匹進行加強免疫；

(3)加強免疫結束后，使用破傷風亞毒素、破傷風類毒素或破傷風亞毒素 與破傷風類毒素的混合物對馬匹進行第二程免疫；

(4)第二程免疫后，使用破傷風亞毒素、破傷風類毒素或破傷風亞毒素與 破傷風類毒素的混合物對馬匹進行第三程免疫；

(5)第三程免疫結束后，提取馬匹的血漿和血清。

破傷風毒素全長1315個氨基酸，分子量為150kDa，共由A、B、C三部 分組成，每部分分子量均為50kDa。C片段是重鏈的C端，具有結合神經細 胞的作用。B片段是重鏈的N端，具有導入作用。A片段是輕鏈，有蛋白酶 活性，可抑制神經傳遞物質的釋放，具有麻痹作用。破傷風毒素的A、B、C 片段總稱“破傷風亞毒素”。