1.一種適用于免疫熒光分析的小麥根部細胞核提取方法，其步驟為：

（1）小麥幼根的獲取：

將小麥種子消毒沖洗后在20-25℃置于放有濕潤濾紙的培養皿中避光發芽，出芽1天后將幼苗移至培養間生長，生長期間補澆2次營養液，待幼苗生長至第5天，取小麥幼根備用，

所述的幼苗在培養間的培養條件為：18-23℃，65-75%相對濕度、光照12-14h/d；

所述的營養液為1/2霍格蘭氏營養液，其配方為：2mM硝酸鈣，2.5mM硝酸鉀，0.5mM硝酸銨，0.5mM磷酸二氫鉀，1mM硫酸鎂，2.5μM碘化鉀，50.2μM硼酸，50μM硫酸錳，15μM硫酸鋅，0.52μM鉬酸鈉，0.05μM硫酸銅，0.053μM氯化鈷，25μM乙二胺四乙酸一鈉鐵，每次添加20-30mL；

（2）細胞核提取：

取步驟（1）獲得的小麥幼根0.5g，將材料截取成4-6mm的根段，置于冰上培養皿中，加入1mLMgSO₄緩沖液，用雙面刀片將材料在溶液中切成小碎塊，使根細胞的細胞核在提取液中流出即可，之后通過過濾器將培養皿中的溶液轉移至離心管中，4℃1500r/min離心8-12min，棄上清，沉淀加MgSO₄緩沖液重懸，即得細胞核懸液；

步驟（2）中所述的MgSO₄緩沖液的組分為：10mmol/L硫酸鎂，50mmol/L氯化鉀，5mmol/L4-羥乙基哌嗪乙磺酸，3mmol/L二硫蘇糖醇，體積比為0.25% TritonX-100，pH值7.4-7.6，現配現用；

步驟（2）中所述的過濾器由450目尼龍膜和滅菌后的1.5 mL離心管組成，其制作方法為將尼龍膜裁剪成直徑2cm的圓片后，折成漏洞狀直接放入離心管中，三層濾膜處靠管壁；

（3）DAPI熒光染色法檢測細胞核：

取20μL步驟（2）所制得的細胞核懸液，滴于附有多聚賴氨酸的載玻片上，制成細胞核貼片，室溫晾干后，在避光條件下，載玻片上滴20μL的DAPI染液染色4-6min，去除染液后，用0.01mM，pH7.2的PBS清洗5次，蓋上蓋玻片，直接置于熒光顯微鏡下觀察并拍照；

（4）免疫熒光組織化學分析：

取出制好的細胞核貼片，在玻片上加50μL質量體積比為3%的BSA溶液，蓋上蓋玻片，于37℃ 封閉1 h；揭去蓋玻片，用0.01mM，pH7.2的PBS溶液清洗3次，每次4-6min；在玻片上加入50μL—抗，蓋上蓋玻片，于4℃孵育12h；揭去蓋玻片，用0.01mM，pH7.2的PBS溶液清洗3次，每次4-6min；避光條件下，在玻片上加50μL帶有FITC標記的二抗，蓋上蓋玻片，于37℃孵育1h；揭去蓋玻片，用0.01mM，pH 7.2的PBS溶液清洗3次，每次4-6 min；之后再進行 DAPI染色，熒光顯微鏡下檢測信號，并拍照記錄結果；

（5）統計分析：

選取5張圖片，實驗重復3次；細胞核直徑、數量的數據統計利用軟件Image J，3次測量取平均值；相關統計數據利用GraphPad Prism 7.00進行雙尾T檢驗分析，P0.05說明存在顯著性差異。