本發(fā)明涉及基因工程及分子生物學(xué)領(lǐng)域，提供一種ABCB1、CYP3A5基因檢測引物組，用于對(duì)含待測位點(diǎn)的核酸片段進(jìn)行特異性擴(kuò)增，所述待測位點(diǎn)包括ABCB1基因上的rs1045642位點(diǎn)和CYP3A5基因上的rs776746位點(diǎn)，所述引物組包括rs1045642引物組、rs776746引物。本發(fā)明還提供了一種基因檢測試劑盒及檢測方法。本發(fā)明的基因檢測引物組能夠?qū)鲜龃郎y位點(diǎn)的核酸片段進(jìn)行特異性擴(kuò)增，使得對(duì)ABCB1、CYP3A5基因突變檢測靈敏度高、假陽性率低；本發(fā)明采用第二代高通量基因測序技術(shù)對(duì)待測位點(diǎn)的基因型進(jìn)行檢測，使得檢測周期短，通量高。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及基因工程及分子生物學(xué)領(lǐng)域，更具體地說，涉及一種ABCB1、CYP3A5基因檢測引物組、試劑盒及檢測方法。

背景技術(shù)

紫杉醇是一種三環(huán)二萜類化合物，具有獨(dú)特的抗腫瘤機(jī)制，其廣泛的抗癌譜和確切的臨床療效已得到人們的重視。后經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)紫杉醇是一種微管的特異性穩(wěn)定劑，可促進(jìn)微管的裝配和保持微管穩(wěn)定。當(dāng)細(xì)胞與紫杉醇接觸后，會(huì)在細(xì)胞內(nèi)積累大量的微管，而這些微管的積累將干擾細(xì)胞的各種正常功能，特別是使細(xì)胞分裂停止于有絲分裂期，阻斷了細(xì)胞的正常分裂。基于上述機(jī)制，紫杉醇是目前所研究報(bào)道的惟一一種能控制癌細(xì)胞生長的植物藥。學(xué)者們推測紫杉醇的不良反應(yīng)的產(chǎn)生主要是因?yàn)樽仙即甲饔糜诩?xì)胞內(nèi)微管系統(tǒng)，而該系統(tǒng)遍布于體內(nèi)所有的細(xì)胞，故紫杉醇的作用未能特異地靶向癌細(xì)胞，而是普遍作用于體內(nèi)各種細(xì)胞。

研究表明人ABCB1基因通過ATP水解提供動(dòng)力將底物外排至細(xì)胞外，可將腫瘤藥物逆濃度梯度從胞漿內(nèi)泵至胞漿外，從而降低化療藥物誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡并導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞耐藥。有研究認(rèn)為，人CYP3A5基因突變是導(dǎo)致其表達(dá)水平發(fā)生改變的主要調(diào)控方式，同時(shí)也能影響其代謝酶的活性，最終表現(xiàn)為代謝底物的能力和速率發(fā)生不同程度的改變，是導(dǎo)致臨床用藥出現(xiàn)個(gè)人、種族間差異最重要的原因。

已發(fā)現(xiàn)的ABCB1基因多態(tài)性如ABCB1 C3435T（rs1045642）突變導(dǎo)致細(xì)胞外泵能力降低，表現(xiàn)在腫瘤細(xì)胞中，則使療效更好。CYP3A5*3（rs776746）基因型是CYP3A5基因的第3內(nèi)含子的6986A>G突變產(chǎn)生的，CYP3A5的表達(dá)水平及其酶的活性密切相關(guān)。CYP3A5*3基因型導(dǎo)致mRNA的剪接發(fā)生改變，使翻譯提早終止，蛋白質(zhì)截短，導(dǎo)致CYP3A5酶活性降低甚至消失，是人群中CYP3A5基因最主要的基因多態(tài)性。

通過對(duì)患者的兩種基因進(jìn)行檢測，得到特定位點(diǎn)的基因型，以基因檢測結(jié)果作為中間結(jié)果的信息的方法，不屬于疾病的診斷方法；以基因型的檢測結(jié)果來確定藥物的選擇，就可以實(shí)現(xiàn)個(gè)體化用藥，避免對(duì)免疫抑制劑不良反應(yīng)。

目前對(duì)基因突變和基因多態(tài)性的檢測，常見有直接測序法、基因芯片雜交法、Taqman熒光探針法、等位基因特異性擴(kuò)增法（Amplification Refractory MutationSystem Real Time PCR，ARMS-RT PCR）、等位基因特異性擴(kuò)增法（AmplificationRefractory Mutation System Real Time PCR，ARMS-RT PCR）等。上述方法靈敏度低、假陽性率高、耗時(shí)較長，通量小。

因此，需要一種新的檢測ABCB1、CYP3A5基因突變的試劑盒及檢測方法，使得對(duì)ABCB1、CYP3A5基因突變的靈敏度高，假陽性率低，且檢測周期短。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種ABCB1、CYP3A5基因檢測引物組、試劑盒及檢測方法，旨在解決現(xiàn)有技術(shù)中ABCB1、CYP3A5基因檢測靈敏度低、假陽性率高、周期長，通量小的技術(shù)問題。

本發(fā)明提供了一種ABCB1、CYP3A5基因檢測引物組，用于對(duì)含待測位點(diǎn)的核酸片段進(jìn)行特異性擴(kuò)增，所述待測位點(diǎn)包括ABCB1基因上的rs1045642位點(diǎn)和CYP3A5基因上的rs776746位點(diǎn)，所述引物組包括rs1045642引物組、rs776746引物組；