[發明專利]一種定量檢測降鈣素原的試劑盒及制備方法在審
| 申請號： | 201810014376.6 | 申請日： | 2018-01-08 |
| 公開（公告）號： | CN108169489A | 公開（公告）日： | 2018-06-15 |
| 發明（設計）人： | 胡國富;朱炎 | 申請（專利權）人： | 浙江艾明德生物科技有限公司 |
| 主分類號： | G01N33/577 | 分類號： | G01N33/577;G01N33/535 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 313000 浙江省湖州市*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 降鈣素原 單克隆抗體 試劑盒 堿性磷酸酶標記 化學發光底物 生物素標記 定量檢測 校準品 包被 制備 定量檢測結果 生物素化抗體 試劑盒靈敏度 堿性磷酸酶 鏈霉親和素 準確度 分裝 配制 組裝 | ||
1.一種定量檢測降鈣素原的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括：堿性磷酸酶標記的降鈣素原的單克隆抗體、生物素標記的降鈣素原的單克隆抗體、包被有鏈霉親和素的載體、降鈣素原校準品和化學發光底物。
2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述載體為固相載體、磁性微粒、微孔板、塑料管或塑料珠。
3.根據權利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述載體為磁性微粒，粒徑2-3μm，活性基團為羧基、醛基或磺酸基，使用濃度為2-5mg/mL。
4.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述化學發光底物為1，2-二氧環已烷衍生物、過氧化氫、過氧化脲。
5.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述化學底物液包括體積比20%的1，2-二氧環已烷衍生物，重量比16%的NaCl，重量比0.5%的KCl和0.2M pH 8.0～10.0的Tris-HCl緩沖液。
6.一種制備權利要求1所述試劑盒的方法，其特征在于包括以下步驟：
（1）用堿性磷酸酶標記降鈣素原的單克隆抗體；
（2）以生物素標記降鈣素原的單克隆抗體；
（3）以鏈霉親和素包被載體；
（4）以降鈣素原純品配制降鈣素原校準品；
（5）分裝上述降鈣素原校準品、堿性磷酸酶標記的降鈣素原的單克隆抗體、生物素化抗體和化學發光底物；
（6）組裝為成品。
7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，所述用堿性磷酸酶標記的降鈣素原的單克隆抗體包括以下過程：
（1）將100μL堿性磷酸酶加入到300μL0.01M pH7.4的磷酸鹽緩沖液;
（2）加入40μL 25%的戊二醛，混勻，2～8℃活化16小時；
（3) 反應液移至截留分子量8000～12000的透析袋中，在0.01M pH7.4的磷酸鹽緩沖液中透析24小時，中間換液2次；
（4）取降鈣素原的單克隆抗體適量，用0.01M pH7.4的磷酸鹽緩沖液配成4mg/mL的溶液；
（5）取步驟4中溶液125μL加入到步驟3中的透析袋中，2～8℃反應24小時；
（6）溶液轉移到玻璃瓶中，加入等體積的甘油，-15℃保存備用。
8.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，所述以生物素標記降鈣素原的單克隆抗體包括以下過程：
（1）取降鈣素原的單克隆抗體1mg，加入0.01M pH7.4的磷酸鹽緩沖液，配成4mg/mL的溶液；
（2）將溶液移至截留分子量8000～12000的透析袋中，在0.01M pH7.4的磷酸鹽緩沖液中透析24小時；
（3）轉移到玻璃瓶中，按照降鈣素原單克隆抗體：生物素為1:15的比例加入生物素，室溫反應1小時；
（4）移至截留分子量8000～12000的透析袋中，在0.01M pH7.4的磷酸鹽緩沖液中透析24小時，中間換兩次溶液；
（5）轉移到玻璃瓶中，加入等體積的甘油，-15℃保存備用。
9.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，所述鏈霉親和素包被載體包括以下過程：
（1）100mL 0.05M 2-嗎啉乙磺酸溶液，依次加入 10 mg 磁性微粒和3 mg鏈酶親和素；
（2） 然后加入10mg/mL 碳二亞鹽酸鹽溶液4μL ，反應2小時，在磁場作用下移去上清液；
（3）加入0.01M pH 7.4的磷酸鹽緩沖液 10 mL，混勻，移去上清液；
（4）使用0.01M pH 7.4的磷酸鹽緩沖液重復洗滌3次，稀釋至0.75mg/mL。
10.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，所述以降鈣素原純品配制降鈣素原校準品包括：用降鈣素原純品配制，用重量比2%牛血清蛋白,0.02M pH7.4的磷酸鹽緩沖液稀釋，分裝為0.5mL/瓶，濃度為 0、0.2、0.5、2、5、20ng/mL，共6瓶，2～8℃保存。
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