本申請?zhí)峁┝酸槍Ξa(chǎn)腸毒素性大腸桿菌(ETEC)的MEFA構(gòu)建體和疫苗。還提供了降低與ETEC相關(guān)的腹瀉發(fā)生率的方法。本公開內(nèi)容提供的代表性粘附素尖端MEFA和代表性主要亞基CFA MEFA?II具有粘附素尖端骨架或主要亞基CFA以及摻入到所述骨架上的一個(gè)或多個(gè)粘附素尖端、粘附素亞基或主要結(jié)構(gòu)亞基表位。提供的粘附素尖端MEFA和CFA MEFA?II有利地防止ETEC分子附著于腸。

背景技術(shù)

腹瀉仍然是生活在發(fā)展中國家的5歲以下兒童死亡的主要原因。產(chǎn)腸毒素性大腸桿菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)是兒童腹瀉和旅行者腹瀉的主要細(xì)菌原因。ETEC細(xì)菌附著上皮細(xì)胞的宿主受體并在小腸中定殖，引發(fā)ETEC相關(guān)的腹瀉病。因此，預(yù)防ETEC附著被認(rèn)為是防御ETEC腹瀉的第一道防線。然而，ETEC菌株產(chǎn)生超過23種免疫異質(zhì)性粘附素，這使得開發(fā)廣泛防止ETEC細(xì)菌附著的疫苗具有挑戰(zhàn)性。因此，需要一種提供針對ETEC的保護(hù)作用的組合物。還需要一種誘導(dǎo)針對多種ETEC粘附素的抗體應(yīng)答的組合物。還需要一種損害、減少或甚至防止ETEC附著的組合物。

發(fā)明內(nèi)容

本公開內(nèi)容通過應(yīng)用MEFA(多表位融合抗原)方法以整合來自CFA/I、CS1、CS2、CS3、CS4、CS5、CS6、CS21、EtpA或其它ETEC粘附素的粘附素尖端或粘附亞基的表位以及以構(gòu)建代表性粘附素尖端MEFA肽(尖端MEFA-I、尖端MEFA-II)或來自CS7、CS12、CS14、CS17、CS19、CS21、EtpA和EaeH粘附素的主要結(jié)構(gòu)亞基的表位用于主要亞基CFA MEFA(CFAMEFA-II)，而克服了現(xiàn)有技術(shù)中固有的問題。然后在小鼠免疫中檢查了每個(gè)尖端MEFA或CFA MEFA的抗原性，并評估其在ETEC疫苗開發(fā)中的潛在應(yīng)用。數(shù)據(jù)顯示用ETEC粘附素尖端MEFA-I腹膜內(nèi)免疫的小鼠對所有9種ETEC粘附素(CFA/I、CS1-CS6、CS21、EtpA)產(chǎn)生IgG抗體應(yīng)答。此外，在與免疫小鼠的血清一起孵育后，表達(dá)這9種粘附素的ETEC和大腸桿菌細(xì)菌對Caco-2細(xì)胞的附著顯著減少。類似地，用ETEC粘附素尖端MEFA-II免疫的小鼠產(chǎn)生抗CS12、CS14、CS17、CS19和EaeH的附著的IgG抗體，并且用主要亞基CFA MEFA-II免疫的小鼠產(chǎn)生抗CS7、CS12、CS14、CS17、CS19、CS21、EtpA和EaeH粘附素的IgG抗體。這些結(jié)果表明由粘附素尖端MEFA或CFA主要亞基MEFA誘導(dǎo)的抗粘附素抗體阻斷了最重要的ETEC粘附素的粘附，表明多價(jià)尖端MEFA-I、尖端MEFA-II和CFA MEFA-II可用于開發(fā)抗ETEC腹瀉的廣泛保護(hù)性抗粘附素疫苗。

因此，本公開內(nèi)容利用MEFA(多表位融合抗原)方法整合來自CFA/I、CS1、CS2、CS3、CS4、CS5、CS6、CS21、CS7、CS12、CS14、CS17、CS19、EaeH和EtpA粘附素的粘附素尖端或粘附亞基的表位，以構(gòu)建至少一個(gè)粘附素尖端MEFA肽。數(shù)據(jù)顯示用粘附素尖端MEFA腹膜內(nèi)或皮下免疫的小鼠產(chǎn)生對所有代表性ETEC粘附素的IgG抗體應(yīng)答。此外，在與免疫小鼠的血清一起孵育后，表達(dá)這些粘附素的ETEC和大腸桿菌細(xì)菌對Caco-2細(xì)胞的附著顯著減少。該MEFA方法還用于將來自CS7、CS12、CS14、CS17、CS19、CS21、EtpA和EaeH粘附素的主要結(jié)構(gòu)亞基的表位整合成CFA主要結(jié)構(gòu)亞基MEFA(CFA MEFA-II)。然后在小鼠免疫研究中檢查了該CFAMEFA-II的免疫原性。數(shù)據(jù)顯示，免疫小鼠對8種靶粘附素中的每一種均產(chǎn)生強(qiáng)IgG抗體；此外，誘導(dǎo)的抗體顯著降低了表達(dá)這8種粘附素中的每一種的ETEC菌株對Caco-2細(xì)胞的粘附。這些結(jié)果表明，各粘附素尖端MEFA或CFA MEFA-II誘導(dǎo)的抗粘附素抗體阻斷了最重要的ETEC粘附素的粘附，表明多價(jià)尖端MEFA(尖端MEFA-I，尖端MEFA-II)或主要結(jié)構(gòu)亞基MEFA(CFA MEFA-II)可用于開發(fā)針對ETEC腹瀉的廣泛保護(hù)性抗粘附素疫苗。“MEFA”是指并包括粘附素尖端和主要結(jié)構(gòu)亞基MEFA兩者。