本發明公開了一種制備丙二酰基化產物的方法，包括使包含植物來源的普適性丙二酰基轉移酶、糖苷化合物受體和酰基供體源的反應體系在適宜條件下進行反應，從而獲得丙二酰基化產物；其中普適性丙二酰基轉移酶的陽性底物包括不同結構類型的O?糖苷和C?糖苷。本發明的制備方法采用植物來源的普適性丙二酰基轉移酶，可利用多種類型的糖苷化合物作為底物，通過酶法催化丙二酰基化反應，彌補了化學法修飾和單一底物酶法修飾的不足。

技術領域

本發明涉及一種制備丙二酰基化產物的方法，具體涉及一種基于植物來源的普適性丙二酰基轉移酶的丙二酰基化產物的制備方法。

背景技術

丙二酰基化對于提高化合物的穩定性、脂溶性、改善生物利用度等方面均具有重要作用。化學法和酶法是目前實現化合物丙二酰基化修飾的兩個主要途徑。化學法實現丙二酰基化修飾具有酰基化程度高、成本低廉等優點，但其反應過程不易控制，反應條件苛刻，尤其產物的特異性較差，所得產物的結構及每種組分的比例難以確定。酶法酰基化由于具有特異性強、催化效率高、反應條件溫和、過程可控以及環境友好等諸多優勢從而成為了化學法的有力補充，并在許多化學修飾難以實現的反應中發揮越來越大的作用。

作為酶法酰基化中的催化酶，可使用植物來源的丙二酰基轉移酶。關于植物來源的丙二酰基轉移酶的研究已取得了一定進展。例如，Suzuki H等在大豆中克隆得到催化異黃酮7-O-葡糖苷-6″-O-丙二酰基化的丙二酰基轉移酶基因GmIF7MaT。Luo J等采用改進的功能基因組學研究策略，將共表達譜與花色苷的積累情況結合起來分析，從擬南芥中鑒定了能夠編碼3個花色苷類酰基轉移酶的基因。Yu XH等從豆科植物Medicago truncatula中鑒定了3個丙二酰基轉移酶基因MtMaT1、MtMaT2、MtMaT3，這三個基因的表達產物能夠特異性地識別丙二酰輔酶A作為受體，催化異黃酮7-O-葡糖苷的丙二酰基化反應，并表現出特異的組織差異表達模式以及對生物、非生物脅迫有不同的應激反應。Taguchi G等在煙草中克隆并表達了能夠催化多種酚苷化合物如黃酮7-O-葡糖苷、黃酮3-O-葡糖苷、萘酚苷化合物丙二酰基化的丙二酰轉移酶NtMaT1。

如上所述，盡管植物來源的丙二酰基轉移酶的研究已取得了一定進展，但迄今鑒定的酶都只針對某一個或某一類特定的化合物的丙二酰基化，無普適性的丙二酰基轉移酶的報道。因此，當外源化合物需要進行丙二酰基取代修飾時，其結構類型如果與丙二酰基轉移酶底物結構差別較大，則無法通過酶催化的方法進行結構修飾。

此外，體外酶法丙二酰基化反應中，為保證反應的充分進行，需要用到過量的丙二酰基輔酶A作為酰基供體，而其價格昂貴，且易降解，在一定程度上限制了酶催化丙二酰基化的應用。

發明內容

為了解決至少部分現有技術中存在的問題，發明人在深入研究后獲得了一個植物來源的能夠接受多種結構類型糖苷化合物作為受體的普適性丙二酰基轉移酶作為催化酶，從而可以實現不同結構類型糖苷化合物的酰二酰基化。基于此完成了本發明。具體地，本發明包括以下內容。

一種制備丙二酰基化產物的方法，其包括使包含植物來源的普適性丙二酰基轉移酶、糖苷化合物和酰基供體源的反應體系在適宜條件下進行反應，從而獲得丙二酰基化產物；其中，所述普適性丙二酰基轉移酶的陽性底物包括不同結構類型的糖苷化合物，既包括單糖苷也包括多糖苷，既包括O-糖苷也包括C-糖苷。

在某些實施方案中，所述普適性丙二酰基轉移酶來源于管花肉蓯蓉。優選，所述普適性丙二酰基轉移酶包含突變且具有丙二酰基化催化活性，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

在某些實施方案中，所述糖苷化合物選自由苯乙醇苷、二苯乙烯苷、萘酚苷、蒽醌苷、黃酮苷、二氫黃酮苷、黃酮醇苷、異黃酮苷、山酮苷、香豆素苷、環烯醚萜苷、木脂素苷、不飽和脂肪酸苷、氰苷、萜類皂苷和二氫查耳酮苷組成的組中的至少一種。