本發明公開了一種用于鑒定土沉香、云南沉香、馬來沉香的SNP分子標記及其應用。本發明基于SNP分子標記建立起了快速鑒定土沉香、云南沉香、馬來沉香的體系，從而實現了快速、準確檢測土沉香、云南沉香、馬來沉香的目的，對于口岸物種檢驗工作等具有重大的意義。

技術領域

本發明涉及木材材種鑒定的分子生物學檢測領域，具體地說，涉及用于鑒定土沉香、云南沉香、馬來沉香的SNP分子標記及其應用。

背景技術

沉香，又名“沉水香”，“水沉香”，古語寫作“沈香”(沈，同沉)。古來常說的“沉檀龍麝”之“沉”，就是指沉香。沉香香品高雅，而且十分難得，自古以來即被列為眾香之首。

與檀香不同，沉香并不是一種木材，而是一類特殊的香樹“結”出的，混合了油脂(樹脂)成分和木質成分的固態凝聚物。而這類香樹的木材本身并無特殊的香味，而且木質較為松軟。據現在的研究，瑞香科沉香屬的幾種樹木，如馬來沉香樹、莞香樹、印度沉香樹等都可以形成沉香。

沉香的價格之貴，素有“木中鉆石”之稱。據知名文化學者揚之水介紹，沉香是中國、日本、印度及其他東南亞國家的傳統藥材和名貴天然香料，在傳統中醫學、藏醫學和印度傳統醫學中已有幾千年的應用歷史，其藥用、精油、香料等方面市場需求量巨大。“粗略統計，目前全世界沉香交易額達200億元以上。據史料記載，在宋代，上等品是一兩沉香一兩金；到了明代，就變成了一寸沉香一寸金?！?/p>

形態學鑒定是沉香鑒定中常采用的方法，但形狀特征易受生境、氣候、生理狀況等的影響而常常導致主觀辨別上的偏差，僅靠形態差異難以準確鑒定。

近年來，利用分子生物學技術進行物種鑒定已經在一些珍惜物種及檢驗檢疫方面得到了應用，如何利用分子生物學技術建立高效、快速、靈敏且準確度高的鑒定方法將是沉香鑒定領域的關鍵技術之一。

發明內容

本發明提供了一種用于鑒定土沉香、云南沉香、馬來沉香的SNP分子標記，所述SNP分子標記位于SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.3所示序列的第190-191堿基，若第190-191位的堿基為GT則鑒定為土沉香，若第190-191堿基為TT則鑒定為云南沉香，若第190-191堿基為CC則鑒定為馬來沉香。

所述SNP分子標記在土沉香、云南沉香、馬來沉香鑒定中的應用。

所述應用進一步包括從土沉香、云南沉香、馬來沉香混合樹種中分別鑒定出土沉香、云南沉香、馬來沉香。

本發明提供了一種用于鑒定土沉香、云南沉香、馬來沉香的核苷酸序列，所述核苷酸序列包括SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.3，或者SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.3所對應的cDNA或mRNA，所述核苷酸序列的第190-191位的堿基為GT則鑒定為土沉香，若第190-191堿基為TT則鑒定為云南沉香，若第190-191堿基為CC則鑒定為馬來沉香。

本發明提供了一種鑒定土沉香、云南沉香、馬來沉香的試劑盒，包括用于特異性檢測SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.3序列第190-191位的堿基為GT、TT或CC的一種或多種引物，或引物和探針的組合。

進一步的，所述的試劑盒內的引物和/或探針選自：用于測序檢測的特異性擴增引物和測序引物，引物序列分別為：

上游引物F1：5'-CGTAACAAGGTTTTCGTAGGTGAAC-3'

下游引物R1：5'-GCTACGTTCTTCATCGAT-3'

測序引物：5'-CGTAACAAGGTTTTCGTAGGTGAAC-3'；

或者，用于HRM-PCR方法鑒定的擴增特異性擴展引物和探針，引物和探針序列分別為：