[發明專利]一種HIP/PAP蛋白的制備方法有效
| 申請號： | 201711355675.8 | 申請日： | 2017-12-16 |
| 公開（公告）號： | CN107936111B | 公開（公告）日： | 2021-09-07 |
| 發明（設計）人： | 宋燕;許元生;陳偉柱 | 申請（專利權）人： | 廣州安辰新藥研究院有限公司 |
| 主分類號： | C07K14/47 | 分類號： | C07K14/47;C07K1/18;C12N15/12;C12N15/85 |
| 代理公司： | 北京中南長風知識產權代理事務所(普通合伙) 11674 | 代理人： | 鄭海 |
| 地址： | 510630 廣東省廣州市黃*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 hip pap 蛋白 制備 方法 | ||
1.一種HIP/PAP蛋白的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)設計目的蛋白的基因序列：根據HIP/PAP蛋白的氨基酸序列SEQ ID NO：1和哺乳動物的密碼子偏好，通過密碼子優化得到編碼HIP/PAP蛋白的核苷酸序列，并據此設計用于表達HIP/PAP蛋白的基因片段FHIP/PAP SEQ ID NO：2；
(2)合成用于表達HIP/PAP蛋白的基因片段FHIP/PAP；
(3)構建表達載體：將合成的用于表達HIP/PAP蛋白的基因片段FHIP/PAP利用EcoRⅠ和HindⅢ雙酶切后，插入同樣雙酶切的pTT5質粒，構建表達載體pTT5-HIP/PAP；
(4)轉染：將表達載體pTT5-HIP/PAP轉染哺乳動物細胞，獲得培養上清；
(5)目的蛋白的純化：離心后獲得表達上清，采用離子交換色譜法進行純化；
(6)目的蛋白的活性測定：采用試劑盒，檢測目的蛋白的抗凋亡活性；
步驟(4)中所述哺乳動物細胞是CHO細胞。
2.根據權利要求1的HIP/PAP蛋白的制備方法，其特征在于，所述CHO細胞是CHO 3E7細胞。
3.根據權利要求1所述的HIP/PAP蛋白的制備方法，其特征在于，步驟(4)中所述轉染包括瞬時轉染和穩定轉染。
4.根據權利要求2所述的HIP/PAP蛋白的制備方法，其特征在于，步驟(5)中所述離子交換色譜法使用離子交換色譜層析Q Sepharose。
5.根據權利要求3所述的HIP/PAP蛋白的制備方法，其特征在于，步驟(6)中所述試劑盒是Caspase Glo 3/7試劑盒。
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