[發明專利]同時表達A型、O型和Asia-1型口蹄疫病毒VP1基因重組腺病毒、構建方法及應用有效
| 申請號： | 201711348735.3 | 申請日： | 2017-12-15 |
| 公開（公告）號： | CN108103034B | 公開（公告）日： | 2022-06-24 |
| 發明（設計）人： | 楊玉艾;任紅濤;劉健鵬;鄒權;齊亞輝 | 申請（專利權）人： | 云南農業大學動物醫學院;北京生科基因科技有限公司;榆林市動物疫病預防控制中心;墊江縣動物衛生監督所;陜西省動物衛生監督所 |
| 主分類號： | C12N7/01 | 分類號： | C12N7/01;C12N15/42;A61K39/135;A61P31/14 |
| 代理公司： | 北京智沃律師事務所 11620 | 代理人： | 王繼勝 |
| 地址： | 650201 云南省*** | 國省代碼： | 云南;53 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 同時 表達 asia 口蹄疫病毒 vp1 基因 重組 病毒 構建 方法 應用 | ||
1.一種同時表達 A型、O型和 Asia-1型口蹄疫病毒 VP1基因重組腺病毒的構建方法，其特征在于包括以下步驟：
步驟一：從 O型、A型和 Asia-1型口蹄疫病毒中分別擴增出 VP1基因；
步驟二：將步驟一中獲得的 O型口蹄疫病毒 VP1基因通過 Kpn I和 Not I酶切位點插入至腺病毒穿梭載體 pAdTrack中的 CMV啟動子，形成腺病毒穿梭載體 pAdTrack-O1；
將步驟一中獲得的 A型口蹄疫病毒 VP1基因通過 Bgl II和 Sal I酶切位點插入至腺病毒穿梭載體 pAdTrack中的 CMV啟動子，通過 EcoRV酶切位點插入 pAdTrack-O1形成腺病毒穿梭載體 pAdTrack-O1-A1；
將步驟一中獲得的 Asia-1型口蹄疫病毒 VP1基因通過 Cla I和 Pst I酶切位點插入至腺病毒穿梭載體 pAdTrack中 CMV啟動子，形成腺病毒穿梭載體 pAdTrack-Y1；
步驟三：將步驟二的腺病毒穿梭載體 pAdTrack-Y1按 PCR方法擴增出含有 CMV啟動子的 CMV-Y1基因，通過 Sma I酶切位點插入至步驟二的腺病毒穿梭載體 pAdTrack-O1-A1中，形成重組腺病毒穿梭載體 pAdTrack-O1-A1-Y1；
步驟四：將步驟三中的重組腺病毒穿梭載體 pAdTrack-O1-A1-Y1經 Pme I酶切線性化后，轉化到含有腺病毒骨架載體 pAd-Easy-1的大腸桿菌 BJ5183感受態細胞中，形成重組腺病毒骨架載體 pAd-Easy-O1-A1-Y1；
步驟五：將步驟四中的重組腺病毒骨架載體 pAd-Easy-O1-A1-Y1經 Pac I線性化后，轉染人胚胎腎細胞 HEK293中，包裝出重組腺病毒 rAd-O1-A1-Y1。
2.如權利要求1所述方法構建的一種同時表達 A型、O型和 Asia-1型口蹄疫病毒 VP1基因重組腺病毒，其特征在于，所述Asia-1型口蹄疫病毒 VP1基因核苷酸序列如SEQIDNo.1所示，O型口蹄疫病毒 VP1基因核苷酸序列如SEQIDNo.2所示。
3.如權利要求 2所述的一種同時表達 A型、O型和 Asia-1型口蹄疫病毒 VP1基因重組腺病毒的應用，其特征是：所述重組腺病毒應用于制備防疫口蹄疫的藥物或試劑中。
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