本發(fā)明公開了一種利用特征多肽制備FST蛋白特異性抗體的方法及其應(yīng)用，所述特征多肽是由SEQ ID NO：1氨基酸序列組成；SEQ ID NO 1：SEDTEEEEEDEDQDYS。利用特征多肽制備FST蛋白特異性抗體，包括以下步驟：S1：用所述特征多肽與KLH偶聯(lián)作為免疫抗原，用所述特征多肽與BSA偶聯(lián)作為檢測抗原；S2：用PBS將免疫抗原與檢測抗原分別稀釋為1mg/ml，分裝冷凍于?20℃冷藏；S3：分別用所述免疫抗原與檢測抗原免疫動物；S4：采集被免疫動物的靜脈血，離心收集上清；S5：抗體純化；S6：Elisa法確定抗體效價；將所述特異性述抗體用Westernblot法檢測豬骨骼肌細(xì)胞中FST蛋白的表達(dá)，進(jìn)而判定豬背最長肌的肌肉含量，并可將其應(yīng)用于豬肉質(zhì)風(fēng)味方面的選育過程中的輔助選擇，在豬種質(zhì)利用方面具有重要意義。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分子生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體是涉及一種利用特征多肽制備FST蛋白特異性抗體的方法及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

隨著人們的生活水平的提高，消費(fèi)者對豬肉品質(zhì)的要求越來越高，如何在不降低生長速度的同時維持一個合適的肌內(nèi)脂水平從而改良肉質(zhì)已成為當(dāng)前豬育種工作中的研究熱點和難點。肌內(nèi)脂肪含量是評定肉質(zhì)優(yōu)劣的一項尤其重要的指標(biāo)，肉的風(fēng)味、多汁性及嫩度隨著肌內(nèi)脂肪含量的增加而改善。

肌肉生長發(fā)育受多種因子在時間和空間上的精密調(diào)控，MSTN/Smad信號通路在哺乳動物胚胎發(fā)育期以及出生后肌肉的生長發(fā)育過程中具有重要的調(diào)節(jié)作用。MSTN主要通過和其受體ActRIIB結(jié)合，激活Smad2、Smad3蛋白后，結(jié)合Smad4形成異源復(fù)合物，進(jìn)入細(xì)胞核作用于靶基因MyoD，從而抑制肌肉的生長發(fā)育；FST是MSTN的拮抗劑，通過結(jié)合MSTN解除其抑制肌肉生長發(fā)育的功能。

通過驗檢測MSTN/Smad信號通路關(guān)鍵基因在兩豬骨骼肌中的發(fā)育性表達(dá)變化，探討部分基因表達(dá)的相關(guān)性，為開展豬種質(zhì)利用具有重要意義。為了檢測FST在骨骼肌生長發(fā)育過程中的表達(dá)，本發(fā)明利用合成多肽制備出能夠與FST特異性結(jié)合的抗體，采用Western-blot技術(shù)檢測了FST蛋白在豬背最長肌中的發(fā)育性表達(dá)，可將其應(yīng)用于豬的肉質(zhì)風(fēng)味方面的選育過程中的輔助選擇，以為改善豬肉的肉質(zhì)提供理論依據(jù)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明解決的技術(shù)問題是：本發(fā)明旨在提供一種利用特征多肽制備FST蛋白特異性抗體的方法及其應(yīng)用，將所制備的特異性抗體采用Western-blot技術(shù)檢測FST蛋白在豬背最長肌中的發(fā)育性表達(dá)。

本發(fā)明的技術(shù)方案是：

一種利用特征多肽制備FST蛋白特異性抗體的方法，所述特征多肽是由SEQ IDNO：1氨基酸序列組成；所述制備方法包括以下步驟：

S1：用所述特征多肽與KLH偶聯(lián)作為免疫抗原，用所述特征多肽與BSA偶聯(lián)作為檢測抗原；

S2：用PBS將免疫抗原與檢測抗原分別稀釋為1mg/ml，分裝冷凍于-20℃冷藏；

S3：分別用所述免疫抗原與檢測抗原免疫動物；

S4：采集被免疫動物的靜脈血，4℃放置過夜，4℃、10000rmp離心30min，收集上清；

S5：抗體純化

(1)將所述特征多肽連接到活化的Sulfolink Resin上，制備抗原親和柱，1mlSulfolink Resin偶聯(lián)1mg多肽；

(2)親和柱用10倍柱體積PBS平衡，流盡溶液；兔血清經(jīng)0.45um濾膜過濾；

(3)血清過抗原親和柱，流盡溶液，收集流穿；

(4)10倍柱體積PBS平衡，流盡溶液；

(5)加入5ml抗體洗脫液，分管收集洗脫液，每管1ml；