本發明提供了一種寨卡病毒與乙腦病毒聯合疫苗，屬于生物制品制備技術領域。本發明的聯合疫苗中含有0.5?10ug/ml乙腦病毒和0.5?10ug/ml寨卡病毒。本發明還提供了寨卡病毒與乙腦病毒聯合疫苗的制備方法，包括乙腦病毒和寨卡病毒的接種、純化和滅活步驟，其中乙腦病毒接種MOI為0.001?0.1CCID₅₀/ml，寨卡病毒接種MOI為0.001?0.1CCID₅₀/ml。本發明的疫苗能夠同時免疫寨卡病毒和乙腦病毒，減少免疫次數，避免了減毒疫苗導致的感染和過敏反應，具有良好的防控寨卡病毒和乙腦病毒引起疾病的能力。

技術領域

本發明屬于生物制品制備技術領域，具體地說，涉及一種含有寨卡病毒和乙腦病毒的聯合滅活疫苗。

背景技術

寨卡病毒自20世紀中期發現，主要在南美、非洲以及東南亞等熱帶地區流行，尚無疫苗保護。而2015年至2016年，在巴西由寨卡病毒引起的新生兒小頭病多達上千例，引起巨大恐慌。隨著我國經濟水平的提高，人民群眾出游前述地區商務及旅行的機會越來越多，感染寨卡病毒的幾率將會增加。而目前尚無寨卡疫苗上市，亟需開發一種對全年齡段有保護作用的寨卡疫苗，為我國人民的身體健康提供安全保障。

流行性乙腦病毒是我國夏秋季流行的主要傳染病之一，除新疆、西藏、青海外，全國各地均有病例發生，年發病人數2.5萬，病死率10％，大約15％的患者留有不同程度的后遺癥。乙腦病毒與寨卡病毒同屬于黃熱病毒屬，兩者皆為披膜病毒，而在我國乙腦病毒疫苗是基礎免疫疫苗之一，目前還沒有乙腦病毒和寨卡病毒的聯合滅活疫苗研制的報道。

發明內容

本發明的目的是提供一種安全、有效預防寨卡病毒和乙腦病毒感染的二聯疫苗。

本發明提供的一種寨卡病毒與乙腦病毒聯合疫苗含有寨卡病毒和乙腦病毒，且兩者病毒均滅活。

進一步，本發明的寨卡病毒與乙腦病毒聯合滅活疫苗含有0.5-10ug/ml乙腦病毒和0.5-10ug/ml寨卡病毒。

優選地，本發明的寨卡病毒與乙腦病毒聯合滅活疫苗含有1-8ug/ml乙腦病毒和1-8ug/ml寨卡病毒。

更優選地，本發明的寨卡病毒與乙腦病毒聯合滅活疫苗含有4-6ug/ml乙腦病毒和4-6ug/ml寨卡病毒。

本發明的聯合疫苗還含有0.25％-1％谷氨酸鈉、0.5％-1％甘露醇、0.5％-1％甘氨酸氧化三甲胺及0.2％-0.62％氫氧化鋁，所述％均為質量體積比。最終pH調節到7.0-8.0。

本發明提供一種寨卡病毒與乙腦病毒聯合疫苗的制備方法，包括制備乙腦病毒滅活液、制備寨卡病毒滅活液、將兩種病毒滅活液按照蛋白含量進行稀釋后混合，添加添加劑，使聯合疫苗中含有0.5-10ug/ml乙腦病毒和0.5-10ug/ml寨卡病毒。

本發明的制備方法中，制備乙腦病毒滅活液的方法包括以下步驟：

(1)乙腦病毒按照分種或混種的方式接種宿主細胞MOI為0.001-0.1CCID₅₀/ml，培養溫度34-36℃，細接種后每2天收獲一次上清液；共收獲4-6次，合并各批次上清液得到乙腦病毒收獲液；

(2)乙腦病毒收獲液澄清、超濾后得到濃縮液，采用分子篩和離子交換兩步層析法純化濃縮液，得到乙腦病毒純化液；

(3)乙腦病毒純化液過濾，調節pH值7.5-8.5，滅活即得。

步驟(1)過程中，除最后一次外，每次收獲后，都補加新鮮的病毒培養液，有助于病毒的后續繁殖。

步驟(2)中，乙腦病毒純化采用分子篩和離子交換兩步，能夠去除超過99％的宿主蛋白和宿主核苷酸。采用此種組合的純化方法可以保證乙腦病毒的回收率大于50％。