2.一種表達鴨肝炎病毒VP3基因的重組禽腺聯病毒活載體疫苗的制備方法，其特征在于：包括以下步驟：

(1)DHAV病毒總RNA的獲取；

(2)根據DHAV SH株VP3基因序列設計一對特異性引物，在起始密碼子上游引入Kozak序列，引物序列為：

VP3-ITR-F:5′-GTACTCGAGACCATGGGAAAGAGAAAACCACGCAGG-3′

VP3-ITR-R:5′-GTAGCGGCCGCTTACTGATTATTGGTTGCCATCTGC-3′；

(3)通過RT-PCR擴增得到DHAV-VP3全長cDNA基因序列；

(4)將VP3全長cDNA序列克隆至含有禽腺聯病毒ITRs序列的桿狀病毒轉移載體pFB-AITR中，獲得重組質粒pFB-AITR-VP3；

(5)將重組質粒pFB-AITR-VP3轉化至DH10Bac感受態細胞進行同源重組，通過抗性、藍白斑篩選以及PCR鑒定后，獲得同源重組正確的桿粒BacmidDNA，并利用堿裂解法提取桿粒；

(6)將制備的重組BacmidDNA在脂質體介導下轉染昆蟲細胞Sf9，72h后，待細胞出現明顯病變，收集細胞液，即為P1代重組桿狀病毒rBac-VP3；

(7)將重組桿狀病毒rBac-VP3擴增至P3代；

(8)將P3代重組桿狀病毒rBac-VP3與表達禽腺聯病毒功能蛋白Rep的重組桿狀病毒rBac-Rep及表達禽腺聯病毒結構蛋白的重組桿狀病毒rBac-VP分別以感染復數為5共感染懸浮培養的昆蟲細胞Sf9，72h后，收集細胞沉淀，反復凍融3次后，離心收獲上清，即為含鴨肝炎病毒VP3基因的重組禽腺聯病毒活載體疫苗。