本發明公開了用于構建猴子BCR文庫的成套試劑與方法。本發明公開的構建猴子BCR文庫的成套試劑為成套試劑A或成套試劑B；成套試劑A由成套試劑A1與成套試劑A2組成，成套試劑A1為序列表中序列1?7所示的七條單鏈DNA，成套試劑A2為在序列表中序列8?17的5′端均標記生物素的十條單鏈DNA；成套試劑B由成套試劑B1與成套試劑B2組成，成套試劑B1為序列表中序列18?24所示的七條單鏈DNA，成套試劑B2為在序列表中序列25?34的5′端均標記生物素的十條單鏈DNA。利用本發明的成套試劑構建的猴子BCR文庫覆蓋度高。

技術領域

本發明涉及生物技術領域中，用于構建猴子BCR文庫的成套試劑與方法。

背景技術

獲得性免疫又稱為特異性免疫，是在抗原刺激下，機體產生的自我保護系統。這個系統主要由淋巴細胞構成，在抗原刺激下，淋巴細胞發生特異性的擴增，進而發揮生理作用。其中，淋巴細胞參與抗原識別的分子，在T、B淋巴細胞上分別是T細胞抗原識別分子(TCR)、B細胞抗原識別分子(BCR)。在人體內，TCR是由異源二聚體分子構成的，主要有αβ型和γδ型，其中，外周循環系統中，超過95％的TCR是屬于αβ型。與此同時，這種二聚體組合也具有多樣性，目前，已知的種類約2X10⁷。而上述的多樣性由其基因決定，主要是染色體V\D\J基因區域存在復等位基因以及缺失和插入現象。在這一復雜基因區域中，有一段基因位置是高可變區，是主要的抗原決定區域，它由部分V\J區和全部的D區構成，被稱為互補決定區3(CDR3)。

B細胞受體是表達在B細胞表面的抗原識別分子，同時，它也能夠被釋放入外周系統，是主要的體液免疫分子。BCR的單體結構，主要是有兩條輕鏈和兩條重鏈所構成。與TCR類似，它也存在一段可變區，分別被稱為互補決定區1、2、3。與TCR需要主要組織相容性物質(MHC)呈遞抗原不同，BCR能夠直接識別抗原，并通過中和等作用，保護機體。

而上述兩種分子其多樣性來源于其基因水平上的多樣性，尤其是BCR，還存在著體突變(一種在B細胞發育成熟后，在擴增過程發生的基因水平的突變)。因此，研究機體的TCR和BCR序列，有助于進一步發現獲得性免疫系統的功能，更加精準地診斷以及治療疾病，有助于促進治療手段和藥物開發。

隨著下一代測序技術(NGS)的出現和發展，能夠高通量的檢測TCR\BCR的序列，建立TCR\BCR庫，并展開相關的研究，而這種技術被統稱為免疫組庫技術。

猴子是一種常用的動物模型，它被長期用于多種人類疾病的研究，并且，由于其機體構成與人類的相似性，也常被用于人類獲得性免疫系統的研究。于1992年，GeneLevinson et al.等，通過RT-PCR和克隆的方法，在恒河猴的外周血中發現了23種TRB重排。盡管在后其研究中，檢測到的序列在增加，但是，尚不滿足TCR\BCR庫檢測的需要。目前，已有對猴子B細胞BCR建庫的方法，該方法中采用5’RACE方法，在收集恒河猴外周血單個核細胞后，提取RNA，加入設計的反轉錄序列，從mRNA 3’端反轉錄至5’端，之后，通過在引物中加入測序接頭PGM，分別從5’RACE和已知序列處擴增cDNA。該方法將3’端引物設計在constant區域上游較遠處，PCR產物較長，達到600-800bp，對測序處理有較大難度；設計的引物僅能覆蓋IgG，無法用于其他免疫球蛋白CDR3區域的檢測；另外，該方法適用于454測序平臺，在illumina測序平臺上的使用尚需驗證。因此，目前急需開發一種新的方法用于猴子免疫系統的高通量測序評估系統。

發明內容

本發明的目的是提供可用于構建猴子BCR文庫的成套試劑以及構建猴子BCR文庫的方法。

本發明首先提供的用于構建猴子BCR文庫的成套試劑(記為成套試劑甲)，為名稱分別為成套試劑A或成套試劑B的成套試劑；

所述成套試劑A包括名稱為成套試劑A1的成套試劑；所述成套試劑A1由名稱分別為成套試劑A11和成套試劑A12的成套試劑組成；