本發明提供了一種靶向CD22的單鏈抗體，所述靶向CD22的單鏈抗體包括如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列，所述靶向CD22的單鏈抗體為人源化單鏈抗體。本發明還提供了一種包括所述靶向CD22的單鏈抗體的嵌合抗原受體T細胞，所述靶向CD22的嵌合抗原受體可以專一性地靶向CD22，尤其可以靶向到不表達CD19的腫瘤細胞，促進T細胞在患者體內的擴增，高效且特異性的殺傷腫瘤細胞。此外，人源化單鏈抗體制得的靶向CD22的嵌合抗原受體T細胞具有更好的維持細胞的活力和殺傷力。本發明還提供了一種靶向CD22的嵌合抗原受體T細胞的制備方法和應用。

技術領域

本發明涉及醫學生物領域，特別涉及一種靶向CD22的單鏈抗體、嵌合抗原受體T細胞及其制備方法和應用。

背景技術

CAR-T(嵌合抗原受體T細胞)技術是一種新型細胞療法，它是將經過CAR改造的T細胞回輸至人體，激活自身免疫系統，對腫瘤細胞進行殺傷，在急性白血病和非霍奇金淋巴瘤的治療上有著顯著的療效，被認為是目前最有效的惡性腫瘤的治療方式之一。

目前CAR-T技術在CD19陽性血液瘤(如B細胞淋巴瘤、急慢性B淋巴細胞白血病)中取得了令人矚目的效果。但由于同類的腫瘤常表達各不相同的免疫表型，舉例來說，當腫瘤細胞出現CD19陰性逃逸，即，存在不表達CD19的腫瘤細胞，則CD19靶點失效，而CART-CD19無法再發揮抗腫瘤效果，因此，有必要提供能靶向惡性腫瘤的其他廣泛表達靶點的CAR-T細胞。此外，CAR-T細胞的在體維持能力(persistence)是CAR-T長期療效的保證，但實際上CAR-T在回輸后幾天到幾周就完全消失，而未能發揮長效持久的殺傷腫瘤細胞的能力。

發明內容

有鑒于此，本發明提供了一種靶向CD22的單鏈抗體，以及包括所述靶向CD22的單鏈抗體的嵌合抗原受體T細胞。所述靶向CD22的嵌合抗原受體可以專一性地靶向CD22，促進T細胞在患者體內擴增，高效且特異性地殺傷腫瘤細胞，同時帶人源化單鏈抗體的靶向CD22的嵌合抗原受體T細胞能夠持久地維持其自我更新活力和殺傷力。本發明還提供了一種靶向CD22的嵌合抗原受體T細胞的制備方法和應用。

第一方面，本發明提供了一種靶向CD22的單鏈抗體，所述靶向CD22的單鏈抗體包括如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列，所述靶向CD22的單鏈抗體為人源化單鏈抗體。

可選的，所述靶向CD22的單鏈抗體的編碼基因包括如SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列。

可選的，所述靶向CD22的單鏈抗體編碼基因應該考慮簡并堿基，即如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的編碼基因包括如SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列，保護范圍還應該保護與SEQ ID NO:2具有堿基簡并性質的核苷酸序列，這些核苷酸序列對應的氨基酸序列仍然為SEQ ID NO:1。

CD22是一類糖結合跨膜蛋白，是血液系統中B細胞的特異性靶標，主要表達在B細胞惡性腫瘤上，可以作為B細胞受體信號通路的抑制性調節因子。本發明第一方面提供的所述靶向CD22的單鏈抗體能夠與CD22蛋白發生特異性結合，尤其可以靶向到不表達CD19的腫瘤細胞。此外，所述靶向CD22的單鏈抗體為人源化單鏈抗體，可以避免引起人機體的免疫反應。

第二方面，本發明提供了一種靶向CD22的嵌合抗原受體T細胞，包括靶向CD22的嵌合抗原受體CAR-CD22，所述CAR-CD22包括從氨基端到羧基端順次連接的靶向CD22的單鏈抗體、胞外鉸鏈區、跨膜區和胞內信號區的氨基酸序列，其中所述靶向CD22的單鏈抗體包括如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。

其中，所述“從氨基端到羧基端順次連接”具體為：所述靶向CD22的單鏈抗體的氨基酸序列的羧基端與所述鉸鏈區的氨基酸序列的氨基端相連，所述胞外鉸鏈區的氨基酸序列的羧基端與所述跨膜區的氨基酸序列的氨基端相連，所述跨膜區的氨基酸序列的羧基端與所述胞內信號區的氨基酸序列的氨基端相連。