本發明提供了一種自然殺傷細胞培養基質及自然殺傷細胞的擴增培養方法，涉及細胞培養技術領域。本發明自然殺傷細胞培養基質主要由無血清培養基、自體血漿和細胞因子組成，應用該細胞培養基質的自然殺傷細胞的擴增培養方法，通過Lymactin?NK抗體聯合細胞培養基質中的細胞因子誘導人源外周血單個核細胞釋放危險信號，間接通過抗體激活自然殺傷細胞并增強細胞殺傷活性。該方法可以在短周期內大量高效的擴增得到高質量的自然殺傷細胞，同時，該方法得到自然殺傷細胞具有純度高以及細胞毒性強等優點。有效緩解了現有自然殺傷細胞培養方法中存在的生產工藝繁瑣、生產成本較高以及自然殺傷細胞擴增倍數低，純度不高難以大規模生產的問題。

技術領域

本發明涉及細胞培養技術領域，尤其是涉及一種自然殺傷細胞培養基質及自然殺傷細胞的擴增培養方法。

背景技術

自然殺傷細胞(Nature Killer cells,NK)是機體固有免疫系統的細胞毒性淋巴細胞，存在于淋巴器官和外周組織中，具有抗腫瘤、抗感染和免疫調節等功能，其無須抗原預先致敏就可以直接識別，并且非特異性地殺傷腫瘤細胞，是人體防御體系的第一道屏障。自然殺傷細胞具有強大的細胞毒活性，它對刺激因素產生的應答十分迅速，而且免疫應答強度高；同時，自然殺傷細胞的殺傷活性無需抗原刺激，也不受MHC分子的限制；此外，自然殺傷細胞還具有強大的細胞因子/趨化因子分泌功能，有助于啟動和活化其他免疫細胞(如T細胞、B細胞、樹突狀細胞和內皮細胞等)的應答。正因為自然殺傷細胞所具有的上述特點，其在固有免疫和適應性免疫中均發揮重要作用，被認為是腫瘤免疫治療的重要效應細胞。但自然殺傷細胞是淋巴細胞中的稀有亞群，在外周血淋巴細胞中約只占10％～20％。正常人體外周血中的自然殺傷細胞含量遠不能滿足臨床治療的需要。

現有自然殺傷細胞的培養方法主要包括以下幾種：

(1)使用飼養層細胞培養法，如使用病毒轉染的B淋巴細胞或腫瘤細胞，以提高自然殺傷細胞擴增倍數。

(2)免疫磁珠分選系統陰性分選法，從人源外周血單個核細胞中獲得少量自然殺傷細胞后，應用不同細胞因子組合培養，以獲得純度高、擴增效率高、細胞毒性強的自然殺傷細胞。

(3)自然殺傷細胞分離試劑盒法，使用商品化試劑盒進行自然殺傷細胞培養。

但上述這些培養方法都具有一定程度的缺點，其中，采用病毒轉染的B淋巴細胞及腫瘤細胞作為飼養層細胞以提高自然殺傷細胞擴增倍數的方法，生產工藝繁瑣且安全性尚待探討；采用免疫磁珠分選系統陰性分選法進行自然殺傷細胞培養，生產成本較高；而采用分離試劑盒的方法，因高純度的自然殺傷細胞在體外擴增效率很低，尚難滿足大規模實驗以及臨床腫瘤免疫治療的需求。目前大多數自然殺傷細胞培養方法均難以同時滿足細胞純度高、細胞毒性強、擴增倍數高等要求。

因此，研究開發一種能夠在短周期內大量高效的擴增得到高質量的自然殺傷細胞的細胞培養基質和細胞培養方法，進而獲得純度高，細胞毒性強的自然殺傷細胞變得十分的必要與緊迫。

有鑒于此，特提出本發明。

發明內容

本發明的第一目的在于提供一種自然殺傷細胞培養基質，所述培養基質能夠大量高效的將人源外周血單個核細胞誘導培養為自然殺傷細胞。

本發明的第二目的在于提供一種自然殺傷細胞的擴增培養方法，該方法可以在短周期內大量高效的擴增得到高質量的自然殺傷細胞，同時，該方法得到自然殺傷細胞具有純度高以及細胞毒性強等優點。

本發明提供的一種自然殺傷細胞培養基質，所述培養基質主要由以下成分組成：無血清培養基、自體血漿和細胞因子；

上述細胞因子包括IL-2、IL-7、IL-12、IL-15和IL-21。