技術領域

本公開涉及細胞回收或檢測方法、以及回收系統。本公開尤其涉及回收或檢測血液中的稀有細胞的方法、以及其中使用的稀有細胞回收系統。

背景技術

血液中含有紅細胞、白細胞和血小板等各種各樣的成分。以疾病的早期發現和診斷等為目的，進行著對血液中所含的這些成分的檢查。

血液中含有血中循環腫瘤細胞/Circulating Tumor Cell(CTC)和免疫細胞等稀有細胞，它們是醫學上重要的細胞。CTC是從原發腫瘤組織或轉移腫瘤組織游離，沿著血流循環的癌細胞(腫瘤細胞)。據信，CTC通過沿著血流循環，運輸到其他臟器等，由此引起轉移。因此，血液中的CTC由于被認為作為轉移性的癌的治療效果的判定或預后預測的因子有用，因此積極進行CTC的解析。

WO2011/108454中公開了如下方法：用過濾器處理血液，使過濾器捕獲血液中的稀有細胞(CTC)，對其進行分析。PLOS ONE，April 2013，Volume 8，Issue 4，e61770中公開了如下方法：制備含有白細胞和稀有細胞的細胞懸浮液，將該細胞懸浮液中所含的全部細胞在設置了多個孔的觀察區域中展開，基于光學拍攝而得到的圖像來檢測稀有細胞。

發明內容

但是，上述的方法中存在如下問題：由于非目標細胞(例如，白細胞)的分離不充分，殘留很多非目標細胞，因此目標細胞(例如，稀有細胞)的分析中需要花費很多時間和勞動力。另外，存在如下問題：由于非目標細胞來源的噪音，不能正確得到目標細胞的分析結果。

進一步，存在如下問題：在進行稀有細胞的分析時，由于待測體中的稀有細胞的濃度非常稀薄，因此需要處理幾ml的待測體，但是在之后的分析中處理少數的細胞時，需要用少量來進行處理。另外，存在如下問題：由于待測體中的稀有細胞的濃度稀薄，因此不能正確得到目標細胞的分析結果。

稀有細胞的基因解析中存在需要以高純度回收少量且不妨礙基因解析的狀態的樣品的問題。

本公開在一個或多個實施方式中，能夠提供一種能夠從含有目標細胞和非目標細胞的待測體中以高純度回收目標細胞的方法和其中使用的系統。

本公開在一種方式中，涉及一種回收待測體中的稀有細胞的方法：包括：

通過能夠捕獲目標稀有細胞的過濾器來過濾含有所述目標稀有細胞和非目標細胞的待測體的步驟(過濾步驟)；

在所述過濾器上對通過過濾步驟被所述過濾器捕獲的稀有細胞和非目標細胞中的所述非目標細胞進行標記的步驟(標記步驟)；

從標記步驟后的過濾器回收含有所述稀有細胞和標記的非目標細胞的溶液，從所述溶液中去除所述標記的非目標細胞，回收含有所述稀有細胞的溶液的步驟(分離回收步驟)；以及

從含有所述稀有細胞的溶液中捕獲所述稀有細胞的步驟(捕獲步驟)

根據本公開，在一個或多個實施方式中，能夠提供一種能夠從含有目標細胞和非目標細胞的待測體中以高純度且少量的液量回收目標細胞的方法。即，根據本發明，能夠以足以進行基因檢查的水平的純度和液量來獲得目標細胞。另外，根據本發明，在一個或多個實施方式中，能夠在不進行核酸精制步驟的情況下，僅通過最少四個步驟(過濾步驟、標記步驟、分離回收步驟和捕獲步驟等)，即可得到上述效果。

附圖說明

圖1是示出本公開的回收方法的一個實施方式中的動作例的例子的流程圖；

圖2是實施例中使用的細胞捕獲/染色裝置的結構示意圖；

圖3是實施例中使用的磁分離裝置的結構示意圖；

圖4是實施例中使用的介電泳裝置的結構示意圖；

圖5是示出實施例的結果(檢測稀有細胞和白細胞的結果)的例子的圖像；

圖6是示出實施例的結果(檢測EGFR的基因突變的結果)的例子的圖表。

具體實施方式

為了正確分析待測體中的目標細胞，要求從待測體以高純度回收目標細胞。在一般的細胞的情況下，由于待測體中含有較多的目標細胞，因此通過反復進行純化步驟，能夠提高目標細胞的純度。然而，在CTC等稀有細胞的情況下，由于血液等的待測體中所含的量非常少(例如，血液8mL中含有數個左右)，除此之外，還含有大量的非目標細胞(例如，白細胞等)。因此，在反復進行純化步驟的情況下，即使能夠去除非目標細胞，也存在稀有細胞損失的風險。因此，在稀有細胞的回收中，不光要求純度，還要求減少目標稀有細胞的損失。另外，由于稀有細胞的分析通過顯微鏡等觀察或通過PCR等基因解析等來進行，因此，要求純化步驟后回收的液量為少量。