技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及過濾膜領(lǐng)域，具體涉及一種用于分離液體中腫瘤細胞的復(fù)合膜及其制備方法。

背景技術(shù)

惡性腫瘤俗稱為癌癥，目前已經(jīng)成為我國居民死亡的首要原因，嚴重影響人民群眾的身體健康。惡性腫瘤主要具有兩個特性：一是永生性，惡性腫瘤細胞可以無限傳代分裂，失去了生長的控制；二是侵襲轉(zhuǎn)移的特性。腫瘤細胞從原發(fā)灶脫離經(jīng)過一系列復(fù)雜的生物學過程到達遠處器官并形成轉(zhuǎn)移灶，這一過程稱為侵襲轉(zhuǎn)移，目前癌癥之所以難以治愈，造成病人死亡的關(guān)鍵就在于其具有侵襲轉(zhuǎn)移的特性。研究表明癌癥致死，90％以上是由于侵襲轉(zhuǎn)移引起的，而不是原發(fā)灶腫瘤對原發(fā)器官的損害。另外，在某些早期惡性腫瘤患者的外周血中就可以檢測到循環(huán)腫瘤細胞(circulating tumor cells，CTC)，在其區(qū)域淋巴結(jié)和骨髓中就能夠檢測到播散性腫瘤細胞(disseminated tumor cells，DTC)。大量證據(jù)表明惡性腫瘤細胞轉(zhuǎn)移并不是晚期事件，其實腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移從腫瘤發(fā)生的早期就已經(jīng)悄悄開始了。因此，我們是否能夠有效的控制治愈癌癥，其關(guān)鍵就在于能否有效的阻斷或逆轉(zhuǎn)腫瘤轉(zhuǎn)移這一過程。

由于在血液中循環(huán)腫瘤細胞的數(shù)量極其稀少，所以先將外周血液標本中的CTC進行富集，然后再對CTC進行識別和分析。目前對CTC的富集、分離、分選主要涉及兩類技術(shù)。第一類主要是采用免疫原理進行純化、分選。這種方法根據(jù)抗原抗體反應(yīng)，利用單克隆或者多克隆抗體與細胞膜表面的腫瘤相關(guān)抗原相結(jié)合，從而達到檢測識別CTC的目的。例如利用能夠與各種上皮特異性抗原(例如：細胞角蛋白、上皮粘附分子、生長因子受體等)相結(jié)合的單克隆抗體來檢測識別CTC。目前基于這種技術(shù)的實驗方法包括：CellSearch系統(tǒng)；CTC芯片；EPIthelialimmunoSPOT；MAINTRAC；膠原蛋白黏附基質(zhì)法。第二類技術(shù)方法根據(jù)CTC的物理特性(密度和體積)進行分離。在對CTC的研究中，從細胞形態(tài)學的角度分析發(fā)現(xiàn)，大多數(shù)的外周血細胞的體積普遍要小于CTC，平均直徑為8-11μm，而CTC的直徑為29.8-33.9μm，僅只有少部分神經(jīng)內(nèi)分泌瘤、燕麥細胞癌等小細胞腫瘤所產(chǎn)生的CTC體積等于或小于正常外周血細胞。根據(jù)這一特性，使用一定孔徑的聚碳酸酯膜對外周血樣本進行濾過，體積較大的腫瘤細胞將會留在膜上，而較小的正常血液細胞將會通過濾膜，從而在聚碳酸酯膜上對腫瘤細胞進行富集，即膜濾過分離腫瘤細胞技術(shù)(Isolation by size of epithelial tumor cells,ISET)。

基于免疫原理的分離CTC的技術(shù)其核心在于對腫瘤細胞表面抗原的選擇。一方面該抗原必須是腫瘤特異表達的，另一方面這種特異表達的抗原必須表達在細胞膜上。由于這種抗原抗體選擇的局限性，造成了以免疫原理分選CTC的局限性。比如目前CTC芯片技術(shù)使用的抗體為EpCAM。EpCAM是上皮細胞表達的一種表面分子，在血液細胞中沒有表達，但是EpCAM也不是在所有上皮腫瘤中都表達陽性。另一方面，腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移是一個復(fù)雜的動態(tài)過程，在這一過程中，腫瘤細胞中的一些細胞會丟失一些細胞膜上的上皮標志樣分子，轉(zhuǎn)而表達一些間質(zhì)來源的分子。這一現(xiàn)象被稱為上皮間質(zhì)樣變(EMT)。由于EMT現(xiàn)象的存在，部分腫瘤細胞會丟失原來表達的上皮標志分子，如丟失EpCAM表達，從而使得這類CTC不能被有效識別分離。總的說來，基于免疫原理分離CTC具有不可忽略的局限性。