本發(fā)明屬于分子生物學檢測技術領域，具體涉及一種豬傳染性胃腸炎病毒檢測試劑盒及檢測方法。針對現(xiàn)有技術缺乏一種操作簡單、成本低廉、反應迅速且結(jié)果準確的檢測豬傳染性胃腸炎病毒的方法的問題，本發(fā)明提供一種豬傳染性胃腸炎病毒檢測試劑盒及檢測方法。該試劑盒包括：檢測豬傳染性胃腸炎病毒的正向外圍引物F3、反向外圍引物B3、交叉引物CPR、正向探針DF5F和反向探針DF5B。本發(fā)明利用核酸恒溫擴增原理檢測豬傳染性胃腸炎病毒，檢測方法靈敏可靠，操作簡單，節(jié)約人力、時間和經(jīng)濟成本，具有重要的意義。

技術領域

本發(fā)明屬于動物疾病分子生物學檢測技術領域，具體涉及一種豬傳染性胃腸炎病毒檢測試劑盒及檢測方法。

背景技術

豬傳染性胃腸炎(transmissible gastroenteritis of swine,TGE)是由豬傳染性胃腸炎病毒(transmissible gastroenteritis virus of swine,TGEV)引起的一種以嘔吐、水樣腹瀉、脫水為主要特征的高度傳染性疾病，美國1945年首次證實該病病原，世界動物衛(wèi)生組織(OIE)將其列為B類疾病中必檢的傳染病。我國至20世紀50年代首次報道以來，目前我國大部分地區(qū)都有該病發(fā)生流行，秋冬為該病高發(fā)期，各種不同品種和周齡的豬都能感染TGEV病發(fā)病，其中以2周齡內(nèi)仔豬發(fā)病后死亡率最高，高達100％；5周齡以上的仔豬感染傳染性胃腸炎后死亡率較低，但會影響仔豬后期的生長，降低仔豬的飼料利用率，是重要的豬病毒性腹瀉病之一，給養(yǎng)豬業(yè)帶來了嚴重危害。然而，該病原與豬流行性腹瀉病毒(PEDV)、豬輪狀病毒(RV)、呼吸道冠狀病毒(PRCV)等其他病原所引起的臨床癥狀相似，僅通過流行病學和臨床癥狀不能作出準確診斷，行之有效的實驗室診斷方法對該病發(fā)生和流行的控制起到了至關重要的作用。

TGEV屬于冠狀病毒科冠狀病毒屬，其基因組為大的單鏈正股RNA，N基因編碼其核衣殼蛋白，在病毒復制、轉(zhuǎn)錄及致病性等方面具有重要作用，且基因結(jié)構高度保守，在疫苗應用及分子診斷方面均有較大價值。

實驗室檢測TGEV的方法很多，這些常規(guī)檢測方法在技術上雖然比較成熟，但目前尚存在一些問題：病毒的分離鑒定是確認該病原最準確的病原學診斷方法之一，一般大多數(shù)傳染病的確定都是依靠病原的分離鑒定。但此方法耗時時間長(7～10天)，且存在成本高、操作過程復雜等缺點，很難滿足臨床診斷所要求的時效性，主要應用于科學研究。電鏡技術檢測TGEV也是常用的病原學診斷方法之一，但由于TGEV與PEDV豬呼吸道冠狀病毒等冠狀病毒形態(tài)相似，僅靠電鏡觀察無法鑒別診斷，免疫電鏡法可以更敏感確切地檢測臨床樣品或細胞培養(yǎng)物中的TGEV，并可提供病毒血清學鑒定。然而，不管是常規(guī)電鏡檢測技術還是免疫電鏡檢測技術，都存在操作復雜，成本高，對儀器設備要求高等缺點。也可用血清中和試驗、酶聯(lián)免疫吸附試驗、免疫熒光法和免疫過氧化物酶技術等免疫學技術檢測TGEV，特異性抗體的質(zhì)量是免疫學檢測準確度的首要因素，而PRCV與TGEV的抗原性有一定的相關性，很易出現(xiàn)假陽性反應，是該技術應用于檢測TGEV的重要缺點之一。常規(guī)RT-PCR方法是目前疫控中心、科研機構所普遍選用的TGEV檢測方法，可免去病毒分離培養(yǎng)的過程，同時，檢測靈敏度和準確度都較常規(guī)病毒分離和免疫學診斷方法高，但該方法對儀器設備要求較高，操作復雜，擴增產(chǎn)物極易造成氣溶膠污染，不適合在基層推廣，多重PCR方法亦存在相同的缺陷。熒光定量PCR雖可解決氣溶膠污染的問題，但昂貴的儀器設備一般的檢測機構難易承受。

LAMP方法是另外一種分子檢測方法，該方法廉價、快速、靈敏度和特異度高，且因其恒溫擴增不需要PCR儀等昂貴設備，且可通過觀察擴增副產(chǎn)物的有無判斷擴增結(jié)果。但是，有研究表明通過擴增副產(chǎn)物觀察結(jié)果沒有電泳法靈敏，而如果開蓋電泳觀察結(jié)果又將大大增加氣溶膠污染的可能性，且LAMP擴增產(chǎn)物所引物的氣溶膠假陽污染比常規(guī)PCR/RT-PCR更嚴重，因此，怎樣有效的檢測LAMP的擴增產(chǎn)物是制約該技術發(fā)展的一大因素。基因芯片技術也是未來疾病快速診斷的一個發(fā)展方向，但是目前該技術還不成熟。

因此，尚沒有一種操作簡單、成本低廉、檢測效果靈敏的檢測方法用來檢測TGEV。