[發(fā)明專利]光敏保護(hù)基保護(hù)的5-醛基胞嘧啶亞磷酰胺單體及其制備方法和寡聚核苷酸的合成和應(yīng)用有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201710600724.3 | 申請(qǐng)日: | 2017-07-21 |
| 公開(kāi)(公告)號(hào): | CN107474091B | 公開(kāi)(公告)日: | 2019-08-23 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人: | 周傳政;席真;李鳳超;章映茜;白靜 | 申請(qǐng)(專利權(quán))人: | 南開(kāi)大學(xué) |
| 主分類號(hào): | C07H19/073 | 分類號(hào): | C07H19/073;C07H1/00;C07H21/04;C07H21/00 |
| 代理公司: | 北京潤(rùn)平知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11283 | 代理人: | 嚴(yán)政;劉依云 |
| 地址: | 300071*** | 國(guó)省代碼: | 天津;12 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關(guān)鍵詞: | 光敏 保護(hù) 胞嘧啶 亞磷酰胺 單體 及其 制備 方法 核苷酸 合成 應(yīng)用 | ||
1.一種光敏保護(hù)基保護(hù)的5-醛基胞嘧啶亞磷酰胺單體,其特征在于,其化學(xué)結(jié)構(gòu)式為:
其中,R為甲基或苯基,“DMTrO-”為二甲氧基三苯甲基,“N(iPr)2-”為N,N-二異丙基胺基;
其中,所述光敏保護(hù)基為1-(2-硝基苯基)丙烷-1,3-二醇。
2.權(quán)利要求1所述的光敏保護(hù)基保護(hù)的5-醛基胞嘧啶亞磷酰胺單體的制備方法,其特征在于,該方法包括以下步驟:
(1)將3′,5′-(特丁基二甲基硅基)-5-醛基-2′-脫氧胞嘧啶、1-(2-硝基苯基)丙烷-1,3-二醇、原甲酸三乙酯和二氯甲烷進(jìn)行第一混合后冷卻,形成第一混合溶液;再將所述第一混合溶液與四氯化鈦進(jìn)行反應(yīng);然后將反應(yīng)后得到的有機(jī)相洗滌、干燥、過(guò)濾、柱層析得到反應(yīng)產(chǎn)物;
(2)將所述反應(yīng)產(chǎn)物與四丁基氟化銨和四氫呋喃進(jìn)行第二混合,形成第二混合溶液,然后將所述第二混合溶液旋蒸除去溶劑,柱層析得到5-[4-(2-硝基苯基)-1,3-二氧六環(huán)-2-基]-2′-脫氧胞嘧啶;
(3)將所述5-[4-(2-硝基苯基)-1,3-二氧六環(huán)-2-基]-2′-脫氧胞嘧啶與三甲基氯硅烷、吡啶進(jìn)行第三混合,形成第三混合溶液;再將所述第三混合溶液與乙酸酐進(jìn)行反應(yīng);然后將反應(yīng)后得到的有機(jī)相洗滌、干燥、過(guò)濾、柱層析得到4-N-酰基-5-[4-(2-硝基苯基)-1,3-二氧六環(huán)-2-基]-2′-脫氧胞嘧啶;
(4)將所述4-N-酰基-5-[4-(2-硝基苯基)-1,3-二氧六環(huán)-2-基]-2′-脫氧胞嘧啶與4,4'-二甲氧基三苯基甲基氯、吡啶進(jìn)行反應(yīng),然后將反應(yīng)后得到的有機(jī)相洗滌、干燥、過(guò)濾、柱層析得到5′-(二甲氧基三苯甲基)-4-N-乙酰基-5-[4-(2-硝基苯基)-1,3-二氧六環(huán)-2-基]-2′-脫氧胞嘧啶;
(5)將所述5′-(二甲氧基三苯甲基)-4-N-酰基-5-[4-(2-硝基苯基)-1,3-二氧六環(huán)-2-基]-2′-脫氧胞嘧啶與雙(二異丙基氨基)(2-氰基乙氧基)膦、1H-四唑和二氯甲烷進(jìn)行反應(yīng),將反應(yīng)后得到的溶液旋蒸除去溶劑,然后進(jìn)行柱層析;
其中,在步驟(1)中,所述1-(2-硝基苯基)丙烷-1,3-二醇、所述3′,5′-(特丁基二甲基硅基)-5-醛基-2′-脫氧胞嘧啶、所述原甲酸三乙酯、所述二氯甲烷和所述四氯化鈦的用量的摩爾比為1mmol:(3-5)mmol:(1.2-1.5)mmol:(5-7)mL:(0.4-0.5)mmol;
所述第一混合的條件包括:溫度為18-25℃,時(shí)間為0.5-1小時(shí),攪拌速度為250-500轉(zhuǎn)/分鐘;
所述冷卻的條件包括:溫度為0-4℃,時(shí)間為0.1-0.5小時(shí),攪拌速度為250-500轉(zhuǎn)/分鐘;以及
所述四氯化鈦以滴加的方式加入所述第一混合溶液中,且步驟(1)所述的反應(yīng)過(guò)程包括兩個(gè)階段,第一階段的反應(yīng)條件包括:溫度為18-25℃,時(shí)間為5-7小時(shí),攪拌速度為250-500轉(zhuǎn)/分鐘,所述四氯化鈦的滴加速率為10滴/分鐘;以及第二階段的反應(yīng)條件包括:溫度為18-25℃,時(shí)間為5-7小時(shí),攪拌速度為250-500轉(zhuǎn)/分鐘,所述四氯化鈦的滴加速率為15滴/分鐘;
其中,在步驟(2)中,所述3′,5′-(特丁基二甲基硅基)-5-醛基-2′-脫氧胞嘧啶、所述四丁基氟化銨和所述四氫呋喃的用量的比為1mmol:(3-4)mmol:(5-7)mL;以及
所述第二混合的條件包括:溫度為18-25℃,時(shí)間為9-11小時(shí),攪拌速度為250-500轉(zhuǎn)/分鐘;
其中,在步驟(3)中,所述5-[4-(2-硝基苯基)-1,3-二氧六環(huán)-2-基]-2′-脫氧胞嘧啶與所述三甲基氯硅烷、所述吡啶和所述乙酸酐的用量的比為1mmol:(5-7)mmol:(9-11)mL:(1.1-1.3)mmol;以及
所述第三混合的條件包括:溫度為18-25℃,時(shí)間為1-2小時(shí),攪拌速度為250-500轉(zhuǎn)/分鐘;以及所述反應(yīng)的條件包括:溫度為18-25℃,時(shí)間為3-5小時(shí),攪拌速度為250-500轉(zhuǎn)/分鐘;
其中,在步驟(4)中,所述4-N-酰基-5-[4-(2-硝基苯基)-1,3-二氧六環(huán)-2-基]-2′-脫氧胞嘧啶與4,4'-二甲氧基三苯基甲基氯、吡啶的用量的比為1mmol:(1.5-2)mmol:(9-11)mL;以及
所述反應(yīng)的條件包括:溫度為18-25℃,時(shí)間為12-18小時(shí),攪拌速度為250-500轉(zhuǎn)/分鐘;
其中,在步驟(5)中,所述5′-(二甲氧基三苯甲基)-4-N-酰基-5-[4-(2-硝基苯基)-1,3-二氧六環(huán)-2-基]-2′-脫氧胞嘧啶與雙(二異丙基氨基)(2-氰基乙氧基)膦、1H-四唑和二氯甲烷的用量的比為1mmol:(1.3-1.6)mmol:(1.3-1.6)mmol:(10-30)mL;以及
所述反應(yīng)的條件包括:溫度為18-25℃,時(shí)間為2-4小時(shí),攪拌速度為250-500轉(zhuǎn)/分鐘。
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