[發(fā)明專利]一種便捷、快速Vero細(xì)胞的復(fù)蘇方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201710527176.6 | 申請日: | 2017-06-30 |
| 公開(公告)號: | CN107164311A | 公開(公告)日: | 2017-09-15 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人: | 馬榮華 | 申請(專利權(quán))人: | 蘇州北開生化設(shè)備有限公司 |
| 主分類號: | C12N5/071 | 分類號: | C12N5/071 |
| 代理公司: | 蘇州市方略專利代理事務(wù)所(普通合伙)32267 | 代理人: | 馬廣旭 |
| 地址: | 215400 江蘇*** | 國省代碼: | 江蘇;32 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關(guān)鍵詞: | 一種 便捷 快速 vero 細(xì)胞 復(fù)蘇 方法 | ||
1.一種便捷、快速Vero細(xì)胞的復(fù)蘇方法,其特征在于:包括以下步驟:將凍存的Vero細(xì)胞凍存管從液氮或者-80℃冰箱中取出,在取出后1min內(nèi)于37℃搖晃至含有Vero細(xì)胞專用凍存液的Vero細(xì)胞液完全融化,將Vero細(xì)胞液均勻加入到盛有7-9ml新鮮的Vero細(xì)胞專用培養(yǎng)基的細(xì)胞培養(yǎng)皿中,順時(shí)針搖晃細(xì)胞培養(yǎng)皿3-5下,于37℃,5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng);所述Vero細(xì)胞專用凍存液以重量組分計(jì),包括以下組分:二甲基亞砜5-15份、羥乙基淀粉3-8份、葡萄糖5-15份、維生素E1-5份、20%甘露醇2-10份、丙二醇1-2份、(S)-(-)-1-(4-氟異喹啉-5-基)磺酰基-2-甲基-1,4-二氮環(huán)庚烷0.8-2份和基礎(chǔ)培養(yǎng)基80-90份。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的便捷、快速Vero細(xì)胞的復(fù)蘇方法,其特征在于:所述Vero細(xì)胞專用培養(yǎng)基包括70-90%的基礎(chǔ)培養(yǎng)基以及10-30%的胎牛血清。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的便捷、快速Vero細(xì)胞的復(fù)蘇方法,其特征在于:所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基以重量組分計(jì),包括以下組分:葡萄糖 82-88份、碳酸氫鈉 12-25份、丙酮酸鈉10-16份、人血白蛋白5-9份、氯化鉀35-45份、無水硫酸鎂 6-10份、氯化鈉70-78份、無水磷酸二氫鈉10-14份、PHA-植物血球凝集素0.4-0.8份、葉酸 0.3-0.5份、肌醇0.8-1.2份、煙酰胺0.3-0.6份、無水氯化鈣25-35份、硝酸鐵0.2-0.4份、丁二酸6-8份、丁二酸鈉12-16份、D-泛酸鈣 0.3-0.6份、酒石酸膽堿0.6-0.8份、核黃素0.1-0.3份、鹽酸硫胺0.2-0.4份、鹽酸吡哆辛 0.3-0.5份、還原谷胱甘肽 0.2-0.6份、膽固醇2-4份、抗壞血酸磷酸酯0.6-1份、聚碳酸酯0.4-0.9份、酚紅鈉1-1.3份和去離子水100份。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的便捷、快速Vero細(xì)胞的復(fù)蘇方法,其特征在于:所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基還包括3-8份氨基酸,所述氨基酸以重量組分計(jì),由以下組分組成:L-鹽酸精氨酸 5-10份、L-鹽酸胱氨酸 3-8份、L-絲氨酸3-6份、甘氨酸1-5份、L-鹽酸組氨酸 4-6份、L-異亮氨酸8-20份、L-亮氨酸7-18份、L-鹽酸賴氨酸10-20份、L-甲硫氨酸1-6份、L-苯丙氨酸2-8份、L-蘇氨酸5-15份、L-色氨酸1-3份、L-酪氨酸5-9份和L-纈氨酸8-12份。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的便捷、快速Vero細(xì)胞的復(fù)蘇方法,其特征在于:所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基還包括2-5份輔助因子,所述輔助因子以重量組分計(jì),由以下組分組成:重組人堿性成纖維細(xì)胞生長因子2-10份、白介素2 3-8份、白介素4 3-6份、白介素14 1-5份、IFN-γ3-6份和神經(jīng)白細(xì)胞素1-4份。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的便捷、快速Vero細(xì)胞的復(fù)蘇方法,其特征在于:所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基以重量組分計(jì),還包括0.006份青霉素和0.01份的鏈霉素。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的便捷、快速Vero細(xì)胞的復(fù)蘇方法,其特征在于:所述青霉素選自10000U/ml,所述鏈霉素選自10000μg/ml。
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