[發明專利]一種用于高通量測序的捕獲基因組靶序列的方法有效
| 申請號： | 201710473569.3 | 申請日： | 2017-06-21 |
| 公開（公告）號： | CN109097443B | 公開（公告）日： | 2022-03-22 |
| 發明（設計）人： | 郭良讓;鄧帥;苗茹;張佩琢 | 申請（專利權）人： | 蘇州吉賽基因測序科技有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/6816 | 分類號： | C12Q1/6816;C12Q1/6869;C40B40/08;C40B40/06 |
| 代理公司： | 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245 | 代理人： | 關暢 |
| 地址： | 215123 江蘇省*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 用于 通量 捕獲 基因組 序列 方法 | ||
1.捕獲探針文庫，其特征在于：所述捕獲探針文庫由表1所示的440個探針組成：LNA探針-1至LNA探針-440，各個LNA探針均為單鏈DNA分子且5’末端均進行了生物素修飾，各個LNA探針中對部分或全部胸腺嘧啶脫氧核糖核苷酸進行鎖核酸修飾，具體進行鎖核酸修飾的位置如表1中下劃線所示；
表1
2.一種從生物DNA中捕獲BRCA1基因和BRCA2基因的靶序列的方法，依次包括如下步驟：
(1)制備基因組DNA文庫；
(2)與權利要求1所述的捕獲探針文庫進行雜交。
3.如權利要求2所述的方法，其特征在于：所述步驟(1)依次包括如下步驟：
(1-1)將基因組DNA進行片段化，得到片段化的基因組DNA；
(1-2)將所述片段化的基因組DNA進行平末端化、5’末端磷酸化和3’末端加腺苷尾，得到末端修復產物；
(1-3)將所述末端修復產物連接接頭，得到連接有接頭的末端修復產物；
(1-4)以所述連接有接頭的末端修復產物為模板，進行PCR擴增反應。
4.如權利要求3所述的方法，其特征在于：所述步驟(1-2)中，“將所述片段化的基因組DNA進行平末端化、5’末端磷酸化和3’末端加腺苷尾”的實現方法為：將所述片段化的基因組DNA和反應混合液混合后，孵育；
所述反應混合液由10×末端修復緩沖液、T4 DNA聚合酶、DNA聚合酶I、T4多聚核苷酸激酶和Bst DNA聚合酶組成；所述10×末端修復緩沖液的組成為800-1000mM MgCl2、20-40mMDTT、8-12mM ATP、0.8-1.2μg/μL BSA和3-5mM dNTPs，以及pH8.1-8.5、400-600mM的Tris-HCl緩沖液。
5.權利要求1中所述捕獲探針文庫的應用，其特征在于：所述應用為從生物DNA中富集BRCA1基因和BRCA2基因中的靶序列。
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