[發明專利]一種中短鏈酰基輔酶A合成酶的應用有效
| 申請號： | 201710440525.0 | 申請日： | 2017-06-13 |
| 公開（公告）號： | CN107083412B | 公開（公告）日： | 2021-05-28 |
| 發明（設計）人： | 劉超 | 申請（專利權）人： | 劉超 |
| 主分類號： | C12P19/32 | 分類號： | C12P19/32;C12N9/10;C12N15/54;C12N15/70 |
| 代理公司： | 濟南金迪知識產權代理有限公司 37219 | 代理人： | 朱家富 |
| 地址： | 252027 *** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 中短鏈酰 基輔 合成 應用 | ||
1.一種丙二酰輔酶A合成酶在制備2-庚烯酰輔酶A中的應用，其特征在于，步驟如下：
(1)制備氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的丙二酰輔酶A合成酶；
(2)利用步驟(1)制得的丙二酰輔酶A合成酶配制如下反應體系：
100mM 4-羥乙基哌嗪乙磺酸；質量體積百分比10％甘油，單位g/ml；100mM氯化鎂；15～50mM2-庚烯酸或2-庚烯酸的鈉鹽；20mM三磷酸腺苷；5mM輔酶A；10μM純化的丙二酰輔酶A合成酶；pH 7.5；
(3)上述反應體系在20～24℃條件下反應7.5～10h，終止反應，去除酶蛋白，經純化，干燥，即得。
2.如權利要求1所述的應用，其特征在于，所述步驟(1)中，制備氨基酸序列如SEQ IDNO.2所示的丙二酰輔酶A合成酶采用如下方法：
使用引物matBF和matBR經PCR反應擴增天藍色鏈霉菌的丙二酰輔酶A合成酶基因matB，然后通過構建表達載體和工程菌，誘導表達，然后經Ni-NTA鎳柱純化丙二酰輔酶A合成酶，即得；
所述引物matBF和matBR的核苷酸序列如下：
matBF:5’-TCGATTGCACATATGTCCTCTCTCTTCCCGGCCCTCT-3’
matBR:5’-ATCGGATAGCTCGAGTCAGTCACGGTTCAGCGCCCGCTT-3’。
3.如權利要求1所述的應用，其特征在于，所述步驟(3)中，去除酶蛋白為采用超濾離心過濾去除。
4.如權利要求1所述的應用，其特征在于，所述步驟(3)中，所述的純化為采用HPLC色譜進行純化。
5.如權利要求1所述的應用，其特征在于，所述步驟(3)中，所述干燥為采用真空冷凍干燥方法進行。
6.一種丙二酰輔酶A合成酶在制備環己甲酰輔酶A中的應用，其特征在于，步驟如下：
(1)制備氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的丙二酰輔酶A合成酶；
(2)利用步驟(1)制得的丙二酰輔酶A合成酶配制如下反應體系：
100mM 4-羥乙基哌嗪乙磺酸；質量體積百分比10％甘油，單位g/ml；100mM氯化鎂；15～50mM環己烷甲酸或環己烷甲酸的鈉鹽；20mM三磷酸腺苷；5mM輔酶A；10μM純化的丙二酰輔酶A合成酶；pH 7.5；
(3)上述反應體系在20～24℃條件下反應7.5～10h，終止反應，去除酶蛋白，經純化，干燥，即得。
7.如權利要求6所述的應用，其特征在于，所述步驟(1)中，制備氨基酸序列如SEQ IDNO.2所示的丙二酰輔酶A合成酶采用如下方法：
使用引物matBF和matBR經PCR反應擴增天藍色鏈霉菌的丙二酰輔酶A合成酶基因matB，然后通過構建表達載體和工程菌，誘導表達，然后經Ni-NTA鎳柱純化丙二酰輔酶A合成酶，即得；
所述引物matBF和matBR的核苷酸序列如下：
matBF:5’-TCGATTGCACATATGTCCTCTCTCTTCCCGGCCCTCT-3’
matBR:5’-ATCGGATAGCTCGAGTCAGTCACGGTTCAGCGCCCGCTT-3’。
8.如權利要求6所述的應用，其特征在于，所述步驟(3)中，去除酶蛋白為采用超濾離心過濾去除。
9.如權利要求6所述的應用，其特征在于，所述步驟(3)中，所述的純化為采用HPLC色譜進行純化。
10.如權利要求6所述的應用，其特征在于，所述步驟(3)中，所述干燥為采用真空冷凍干燥方法進行。
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