技術領域

本發明涉及臨床醫學、生物醫學與再生醫學技術領域，尤其是涉及一種超臨界流體技術制備軟組織去細胞基質的方法。

背景技術

去細胞基質是用適當的方法將組織/器官進行去細胞處理，除去組織中可能引起排斥反應的細胞成分，保持組織/器官的三維結構。與金屬、塑料等非動物來源的材料相比，去細胞基質的成分和結構更接近人體組織，生物相容性更優異，這使之成為組織工程修復中應用最為廣泛的材料。去細胞的過程就是通過物理方法、化學方法和生物酶等方法除去組織/器官中的細胞，盡量降低其中的細胞成分等免疫原性物質的含量。去細胞方法的有效性取決于多種因素，如細胞類型、組織密度、厚度和脂質含量等。

軟組織去細胞基質中，含有豐富的膠原蛋白、氨基聚糖等，具有良好的生物相容性和生物力學性能。多種軟組織去細胞基質，如真皮去細胞基質、小腸黏膜下層去細胞基質、血管去細胞基質等，在組織工程研究中已經被廣泛用于皮膚、血管、腹壁等組織缺損的再生修復，并表現出良好的促進組織再生能力。因此，將軟組織中的細胞成分，使之成為不含細胞的軟組織去細胞基質，可以用作合適細胞遷移、生長和增殖的生物支架材料。

現有的軟組織去細胞基質制備工藝多采用蛋白酶和十二烷基硫酸鈉(SDS)等溶液除去組織中的細胞，但這些試劑對組織的作用劇烈，對基質成分破壞嚴重，容易導致組織基質降解。另外，這些試劑不易除去，殘留在組織中可能會引起細胞毒性，生物相容性較差。

傳統的軟組織去細胞基質制備工藝容易導致基質成分容易被破壞，而且試劑殘留嚴重，植入組織中可能引起嚴重的免疫排斥反應。

傳統的軟組織去細胞基質制備工藝可能導致基質降解，力學性能下降。

傳統的軟組織去細胞基質制備工藝需要耗費大量的時間除去組織中的殘留細胞和殘留的試劑。

發明內容

本發明的目的在于提供一種軟組織去細胞基質的制備方法，該方法去細胞效率高，對軟組織的基質成分的破壞更小，同時使其免疫原性低，生物相容性好。

為解決上述技術問題，本發明采用如下技術方案：

一種軟組織去細胞基質的制備方法，該方法包括：使用超臨界流體技術制備軟組織去細胞基質，所述軟組織為天然軟組織，所述天然軟組織包括小腸組織，血管組織，肌肉組織，心臟組織，瓣膜組織，肺組織，脾臟組織，腎臟組織，肝臟組織，胃組織，膽囊組織，脂肪組織，軟骨組織，氣管組織，食道組織，膀胱組織，輸尿管組織，輸卵管組織或子宮組織。

優選地，該方法具體包括預處理，消毒，去細胞，漂洗和滅菌步驟。

優選地，所述預處理為在4-10℃條件下，除去所述軟組織中的雜質組織，洗凈待用。

優選地，所述消毒為用過氧乙酸溶液、乙醇溶液和新潔爾滅中的一種振蕩浸泡或幾種混合后振蕩浸泡經過預處理的軟組織，再用生理鹽水或磷酸鹽緩沖溶液或去離子水漂洗至pH為中性。

優選地，所述過氧乙酸溶液的濃度為0.01-0.1wt％；所述乙醇溶液的濃度為1-10％；所述新潔爾滅的濃度為0.05-1wt％；所述浸泡時間為0.5-24h。優選地，所述去細胞和漂洗均采用超臨界CO₂流體處理。

優選地，所述去細胞步驟的流體處理的條件為：處理的時間為0.5-24h，處理的壓強為8-40MPa，處理的溫度為33-40℃，處理后的泄壓速度為0.1-1MPa/min。

優選地，所述去細胞步驟的流體處理過程中加入甲醇、無水乙醇、三氟乙醇和丙酮中的一種或多種極性溶劑作為夾帶劑，所述夾帶劑體積為所述軟組織總體積的1-100倍。

優選地，所述漂洗步驟的流體處理的條件為：處理的時間為6-48h，處理的壓強為8-40MPa，處理的溫度為33-40℃，處理后的泄壓速度為0.1-1MPa/min；所述漂洗步驟的流體處理過程中加入濃度為0.5-10wt％的三羥甲基氨基甲烷溶液或無水乙醇作為夾帶劑，夾帶劑的體積為組織體積的1-100倍。

上述方法制備的軟組織去細胞基質。

本發明的有益效果如下：

1.超臨界CO₂擴散系數大，傳質速度快，能在短時間內滲透到軟組織基質內部，在數分鐘或者數小時就能滲透到軟組織基質內部，而傳統的化學試劑通常需要1天甚至數天才能完全滲透至軟組織基質內部，作用于組織中的細胞；

2.CO₂具有良好的脂質溶解性能，可以溶解細胞中的脂質成分，破壞細胞膜的完整性；