技術領域

本發明屬于脂肪移植和干細胞治療領域，尤其涉及一種富含脂肪干細胞和細胞外基質的脂肪凝膠制備方法。

背景技術

脂肪干細胞和基質血管片段細胞在干細胞治療領域的應用越發廣泛，尤其是基質血管片段細胞的應用已在眾多國家展開臨床試驗，其在提高脂肪移植后保存率以及創面修復方面優勢明顯：1、脂肪組織新鮮分離得到的脂肪干細胞中含有大量的、具有生物學活性的自體脂肪干細胞；2、來源于自身脂肪組織，無免疫排斥反應；3、人體內儲量豐富；4、無需體外培養，降低細菌污染的風險。

然而現有技術在獲取脂肪凝膠的過程較為復雜，成本較高，對于脂肪凝膠的提取不能達到很好的效果，尤其是不能夠去除成熟的脂肪細胞及油脂，因此，不能為脂肪移植提供更好的材料。

發明內容

為了解決上述問題，本發明旨在提供一種富含脂肪干細胞和細胞外基質的脂肪凝膠制備方法，包括以下步驟：

1）用帶螺紋注射器抽取移植用脂肪顆粒，在抽取的脂肪顆粒中添加肝素鈉，上、下顛倒帶螺紋注射器將其混勻；

2）將上述脂肪顆粒放入第一離心管中，以1200g/min速度離心3min，離心后，脂肪顆粒分為上、下兩層，去除下層膨脹液后，將上層的脂肪顆粒轉移至第一注射器中；

3）將裝有脂肪顆粒的帶螺紋注射器與第二注射器通過脂肪破碎器連接，推動含有脂肪顆粒的帶螺紋注射器的活塞，將脂肪顆粒通過脂肪破碎器推注至對側的第一注射器中，推注速度為5-10ml/s，如此反復推注50次，得到破碎脂肪；

4）將裝有破碎脂肪的第二注射器擰下，通過脂肪乳化器與第三注射器對接，推動含有破碎脂肪的第二注射器活塞，將破碎脂肪通過脂肪乳化器推注至第三注射器中，推注速度為5-10ml/s，乳化一次，得到乳糜狀脂肪；

5）將乳糜狀脂肪放入到第二離心管中，按照乳糜狀脂肪的體積，加入聚乙二醇進行脂肪萃取，將乳糜狀脂肪和聚乙二醇的混合物上下緩慢顛倒，可見黃色油脂匯集，并有絮狀物生成，完成油脂的抽提；

6）將油脂抽提后混合液裝入第四注射器以3000g/min的速度離心10min，離心后，混合液分為上、中、下三層，下層為萃取劑層，中層為脂肪凝膠層，上層為油脂層；

7）輕推第四注射器，去掉下層的萃取劑后，將第四注射器與第五注射器通

過三通對接，收取中層脂肪凝膠層進入第五注射器中，得到高度濃縮的脂肪凝膠。

進一步地，所述步驟1）中的肝素鈉濃度為10U/ml。

進一步地，所述步驟3）中的脂肪顆粒通過脂肪破碎器進行脂肪破碎。

進一步地，所述步驟4）中的破碎脂肪通過脂肪乳化器進行乳化和過濾，乳化器的孔徑大小為0.6mm，乳化器上孔的數量為9個。

進一步地，所述步驟5）中乳糜狀脂肪的體積與聚乙二醇的體積的比例為10:1，用于乳糜狀脂肪的絮凝沉淀，從而進行油脂的抽提。

進一步地，所述步驟7）中的中層為高度濃縮的脂肪來源于干細胞和細胞外基質的移植材料。

優選地，所述移植材料用于面部年輕化及軟組織損傷修復。

進一步地，所述第一注射器、第二注射器、第三注射器、第四注射器、第五注射器、第一離心管以及第二離心管，在使用前均經過殺菌消毒，并放置于密閉袋中備用。

進一步地，本發明的一種富含脂肪干細胞和細胞外基質的脂肪凝膠脂肪填充材料，其制備方法為上述所述的方法。

本發明的一種富含脂肪干細胞和細胞外基質的脂肪凝膠制備方法的優點在于：

1.本發明在獲取脂肪顆粒后，采取了離心的方式，在簡單的操作流程下，致使脂肪顆粒先出現簡單的分層后，隨即去除脂肪顆粒中多余的膨脹液后，為后續的操作提供更為優質的脂肪顆粒。

2.本發明中的脂肪顆粒采用的是特殊結構的專用脂肪破碎器，將脂肪顆粒破碎的更徹底、更均勻。

3.本發明中破碎的脂肪可以通過脂肪乳化器進行乳化操作，而且本發明提供的脂肪乳化器不僅具有乳化破碎脂肪的功能，而且脂肪乳化器上設置有多個孔，孔所在的板相當于篩網，可用來對乳化后的脂肪進行過濾。

4.本發明采用乳糜狀脂肪與聚乙二醇的體積比為10:1的比例設置，可對乳糜狀脂肪進行油脂的抽提。

5.本發明中采用了3000g/min的離心速率對乳糜狀脂肪進行離心，使得乳糜狀脂肪達到最佳的分層效果。

6、本發明中采用的注射器在使用前均經過殺菌消毒，并放置于密閉袋中，保證了操作過程的嚴謹度。