技術領域

本發明涉及一種提高棉花黃萎病抗性的方法，具體地說是涉及一種利用誘導劑提高棉花黃萎病抗性的方法。

背景技術

棉花是我國重要的經濟作物，是國防、紡織、化工等行業的主要原料之一。然而，棉花的病蟲害一直限制棉花種植業的發展，特別是黃萎病，素有棉花“癌癥”之稱，對棉花的產量和質量造成重大負面影響。

目前提高棉花黃萎病抗性的方法有很多，其中利用枯草桿菌或者芽孢桿菌等微生物制劑合并化學制劑噴施可提高抗病性，但是大量使用農藥對環境造成污染，破壞農田的生態平衡。專利CN1397166A公開了利用質量分數為80%乙酰水楊酸與20%硼砂混合后與水配成1：1000的溶液進行棉花葉面噴施，利用中醫的方法對已經感病的棉花植株進行治療。然而，棉花的黃萎病菌從根部接菌，到植株葉片表現出枯萎、枯黃等可見的癥狀一般需要10天左右的時間，在這期間，大量致病毒素已經通過維管束擴散至整株。

此外，利用抗病相關基因對棉花進行轉化也是提高棉花黃萎病抗性的一種方法，但是棉花轉基因具有基因型限制，現今沒有通過轉抗病基因提高黃萎病抗性的棉花品種用于生產。水楊酸（SA）是一種小分子酚類物質，廣泛存在于植物的葉片和繁殖器官中，其在棉花抗逆、低溫出苗、種衣劑等方面應用廣泛，但尚未有將水楊酸作為誘導劑提高棉花抗病性，并提出精確誘導時間、噴施時間的相關報道。

發明內容

本發明的目的就是提供一種利用誘導劑提高棉花黃萎病抗性的方法，以解決現有體高棉花黃萎病抗性的方法污染環境、僅針對感病植株等問題。

本發明的目的是這樣實現的：

一種利用誘導劑提高棉花黃萎病抗性的方法，采用濃度為0.5~10mmol/L的水楊酸溶液為誘導劑，所述SA溶液與黃萎病誘導的NPR1抗病表達模式一致，在出現黃萎病的前三天采用SA溶液噴施棉花葉片，以獲得較佳黃萎病抗性。

所述誘導劑為0.5mmol/L的水楊酸溶液。

在第一次噴施SA溶液之后，每隔3~5天再噴施一次SA溶液，以維持棉苗體內的抗病水平。

本發明采用水楊酸作為誘導劑誘導變化產生抗黃萎病抗性，經水楊酸處理后減少了病原菌對棉苗的傷害，并且在第一次噴施處理SA后，每隔3~5天再噴施一次SA溶液，可維持棉苗體內的抗病水平。在田間黃萎病爆發高峰的6月20日與8月20日前10~15天噴施SA溶液，為提高抗病性的較佳時間。

本發明提高棉花黃萎病抗性的方法簡單、成本低廉，提高棉花黃萎病抗性的效果良好，具有一定的應用前景。

附圖說明

圖1是NPR1.1基因在不同濃度水楊酸溶液處理下的表達情況柱狀圖。

圖2是NPR1.1基因在黃萎病菌接菌處理下的表達情況柱狀圖。

具體實施方式

下面結合實施例對本發明做進一步的闡述，下述實施例僅作為說明，并不以任何方式限制本發明的保護范圍。下述實施例均實現了本發明的目的。

1. 材料的來源

供試棉花種子為冀228，種子由河北省農林科學院棉花研究所提供。

2. 棉苗培育

選取大小基本一致的飽滿的脫絨種子，37度溫水浸泡過夜，露白后，放置于雙層濾紙上，在種子盒中發芽1天。選取發芽長度一致的種子，播種于塑料營養缽，基質為蛭石。澆灌Hoagland營養液，置于人工氣候箱中培養，溫度28℃/18℃，相對濕度70%，光照16h/黑暗8h條件下培養3周。實驗設0、0.5mmol/L、2mmol/L三個水楊酸（SA）處理濃度。每個處理播種20盆，每盆播5粒，待棉苗三葉期時，供SA噴灑處理。

3. 孢子懸浮液的制備

將河北省農林科學院植物保護研究所提供的Vlx2-1保存于-70℃的黃萎病菌孢子液涂于PDA 平板上，在25℃條件下暗培養活化一周。用接種針取活化后的邊緣菌塊并用滅菌水震蕩懸浮，然后取1 mL 菌液平鋪到新的PDA 平板上。五天后用滅菌水從平板上洗下孢子，并將濃度調至105 spores/mL。

4. SA與黃萎病菌誘導下抗病相關基因的表達模式分析

分別采用0、0.5、2 、5、10 mmol/L水楊酸（SA）噴施三葉期的棉苗，在經噴施處理后0h、1h、2h、24h、48h、96h、120h提取葉片RNA，反轉錄后對GbNPR1.1基因進行熒光定量PCR檢測。上述處理均設置三次重復。