技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種利用基因槍法介導(dǎo)遺傳轉(zhuǎn)化毛竹的方法，屬于植物轉(zhuǎn)基因技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

竹類是禾本科(Gramimineae)竹亞科(Bambusoideae)多年生常綠植物。全世界竹類資源約70多屬，1250種，我國竹類資源共有39屬，500多種，竹林面積、蓄積量等均居世界第一位，主要分布在北緯40°以南地區(qū)，既是重要森林資源之一，同時(shí)也是重要的可再生資源。對于竹纖維品質(zhì)的提高主要有兩種方法：一是常規(guī)育種方式，但因竹開花具有不確定性，且開花后即死亡等特點(diǎn)，受到的限制巨大；二是通過基因工程手段在分子水平上對其進(jìn)行改良。然而目前為止，竹纖維的優(yōu)越性主要通過一些理化分析得到驗(yàn)證，卻未在分子水平上進(jìn)行深入研究。

目前，竹類基因克隆及其遺傳改良方面的研究尚處起步和探索階段。在基因克隆方面，盡管相繼在慈竹、綠竹、毛竹上克隆了調(diào)控竹木質(zhì)素相關(guān)合成酶基因，但未見在竹中成功進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化的研究報(bào)道。

毛竹(Phyllostachys pubescens)作為我國南方一種重要的森林資源，具有較高的社會(huì)、經(jīng)濟(jì)和生態(tài)效益，在竹產(chǎn)業(yè)中具有重要地位。毛竹(Phyllostachys pubescens)是單軸散生型竹類植物。毛竹種子基因型差異大，不同基因型的毛竹種胚愈傷組織誘導(dǎo)率和愈傷組織質(zhì)量差異也較大，重復(fù)性不好，目前僅有少量有關(guān)毛竹愈傷組織誘導(dǎo)和再生的報(bào)道；而且在篩選培養(yǎng)的過程中常用農(nóng)桿菌抑菌劑如羧卞青霉素和頭孢青霉素等，對毛竹愈傷組織的傷害較大，目前尚無成功遺傳轉(zhuǎn)化毛竹的例子被報(bào)道。

農(nóng)桿菌介導(dǎo)法主要應(yīng)用于雙子葉植物，而在單子葉植物應(yīng)用上受到諸多限制，主要的問題是農(nóng)桿菌主要侵染雙子葉植物和極少數(shù)單子葉植物，對大部分單子葉植物特別是禾本科植物不敏感，而世界上大部分最重要的糧食、經(jīng)濟(jì)作物均為禾本科單子葉植物，從而限制了它的適用范圍。此外，農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化能否取得成功對基因型的依賴性也比較強(qiáng)，即使是雙子葉植物也有不少品種受基因型的限制而難以被農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種竹子的遺傳轉(zhuǎn)化的方法。

本發(fā)明提供的竹子的遺傳轉(zhuǎn)化的方法包括如下步驟：

(1)將竹子種子的胚在預(yù)培養(yǎng)基中進(jìn)行預(yù)培養(yǎng)，得到預(yù)培養(yǎng)后的成熟胚；

(2)利用基因槍法將目的基因轉(zhuǎn)化所述預(yù)培養(yǎng)后的成熟胚，培養(yǎng)，得到轉(zhuǎn)基因竹子。

上述方法中，所述基因槍法的轟擊參數(shù)如下：金粉量：80-240ug；轟擊距離：6-12cm；轟擊壓力：1100-1550psi；真空度：27。

上述方法中，所述基因槍法的轟擊參數(shù)如下：金粉量：160ug；轟擊距離：6cm；轟擊壓力：1350psi；真空度：27。

上述方法中，所述預(yù)培養(yǎng)基是將MS大量元素溶液、B5有機(jī)元素溶液、B5微量元素溶液、MS鐵鹽溶液、2,4-D、KT、IBA、蔗糖和凝固劑混勻得到的培養(yǎng)基。

上述方法中，所述MS大量元素溶液包括KNO₃、NH₄NO₃、CaCL₂、MgSO₄·7H₂O和KH₂PO₄。

上述方法中，所述B5有機(jī)元素溶液包括肌醇、煙酸、煙酸硫銨和鹽酸吡哆醇。

上述方法中，所述B5微量元素溶液包括KI、H₃BO₃、MnSO₄·4H₂O、ZnSO₄·7H₂O、Na₂MoO₄·2H₂O和CoCl₂·6H₂O。

上述方法中，所述MS鐵鹽溶液包括FeSO₄·7H₂0和NA₂EDTA。

上述方法中，

所述2,4-D在所述預(yù)培養(yǎng)基中的濃度為2mg/L；

所述KT在所述預(yù)培養(yǎng)基中的濃度為0.2mg/L；

所述IBA在所述預(yù)培養(yǎng)基中的濃度為0.4mg/L；

所述KNO₃在所述預(yù)培養(yǎng)基中的濃度為1.9g/L；

所述NH₄NO₃在所述預(yù)培養(yǎng)基中的濃度為1.65g/L；