本發明公開了一種A型流感病毒溫度敏感性的關鍵磷酸化位點及其應用。本發明首先保護一種重組病毒，命名為病毒WSN?Y385F，是將A型流感病毒基因組中編碼NP蛋白的第385位酪氨酸殘基的密碼子突變為苯丙氨酸殘基的密碼子得到的重組病毒。病毒WSN?Y385F為溫度敏感型病毒，在37℃可以正常復制并存活，在33℃不能正常復制并且不能存活。本發明還保護一種抑制A型流感病毒的NP蛋白發生磷酸化的方法，是將A型流感病毒的NP蛋白自N末端第385位氨基酸殘基由酪氨酸突變為苯丙氨酸。本發明對于流感病毒侵染的機理分析，流感病毒的防治等具有重大價值。

技術領域

本發明涉及一種A型流感病毒溫度敏感性的關鍵磷酸化位點及其應用。

背景技術

A型流感病毒包含8個分節段的RNA片段，利用這些RNA片段，共能編碼14種病毒蛋白。而病毒基因組的復制和轉錄需要由RNP復合物這一功能單元來完成。病毒感染宿主細胞面臨著2層屏障，4次穿梭。

第一個屏障是病毒進入細胞需要穿過細胞質膜，這時病毒利用血凝素蛋白HA和細胞表面的唾液酸受體結合，進行發生內吞作用入侵到宿主細胞內部。

之后基質蛋白M1會釋放vRNP復合物到細胞質中，而由于基因組復制和轉錄需要在細胞核內進行，此時的vRNP復合物面臨的第二道屏障，即細胞核膜。vRNP會利用NP蛋白N端的非典型雙向NLS同細胞核運輸受體蛋白importin-α結合，從而得以穿過核孔復合物，進入到細胞核內部開始復制和轉錄。

轉錄產生的mRNA在細胞質得到翻譯，新合成的病毒聚合酶組分又會分別利用自身的NLS進入到細胞核重新組裝成RNP復合物。

待病毒基因組復制完畢后，RNP復合物會利用NP蛋白同M1蛋白和NEP蛋白形成一個大的復合物，再利用細胞質運輸蛋白CRM1蛋白將之運輸到細胞質中，完成再一次的穿梭屏障，然后組裝成完整的病毒粒子。

NP蛋白在兩次穿梭核膜的過程中，發揮著重要的作用。

發明內容

本發明的目的是提供一種A型流感病毒溫度敏感性的關鍵磷酸化位點及其應用。

本發明首先保護一種重組病毒，命名為病毒WSN-Y385F，是將A型流感病毒基因組中編碼NP蛋白的第385位酪氨酸殘基的密碼子突變為苯丙氨酸殘基的密碼子得到的重組病毒。病毒WSN-Y385F為溫度敏感型病毒，在37℃可以正常復制并存活，在33℃不能正常復制并且不能存活。

所述A型流感病毒具體可為WSN病毒A/WSN/1933(H1N1)毒株。

所述NP蛋白如序列表的序列1所示。

本發明還保護一種蛋白質，命名為蛋白質NP-Y385F，是NP蛋白的第385位酪氨酸殘基突變為苯丙氨酸殘基得到的蛋白質。

所述NP蛋白如序列表的序列1所示。

編碼蛋白質NP-Y385F的基因也屬于本發明的保護范圍。編碼蛋白質NP-Y385F的基因命名為基因NP-Y385F。

基因NP-Y385F具體可為如下(a)或(b)：

(a)編碼區如序列表的序列10自5’末端第26-1522位核苷酸所示的DNA分子；

(b)序列表的序列10所示的DNA分子。

含有基因NP-Y385F的重組質粒也屬于本發明的保護范圍。

含有基因NP-Y385F的重組質粒具體可為重組質粒pHH21-NP-Y385F。重組質粒pHH21-NP-Y385F為：在載體pHH21的多克隆位點(例如BsmBI酶切位點)插入基因NP-Y385F得到的重組質粒。