[發明專利]標記的核苷酸類似物、反應混合物以及測序方法和系統有效
| 申請號: | 201680079672.3 | 申請日: | 2016-11-21 |
| 公開(公告)號: | CN108697499B | 公開(公告)日: | 2021-06-22 |
| 發明(設計)人: | 盧博米爾·塞博;吉恩·沈;史帝芬·余;霍尼·奧蘇納;尤里·拉平;路易斯·布羅格利;安德烈·費多羅夫 | 申請(專利權)人: | 加利福尼亞太平洋生物科學股份有限公司 |
| 主分類號: | C09B69/10 | 分類號: | C09B69/10;C12M1/34;C12M1/00 |
| 代理公司: | 北京天昊聯合知識產權代理有限公司 11112 | 代理人: | 王靜;丁業平 |
| 地址: | 美國加利*** | 國省代碼: | 暫無信息 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | 標記 核苷酸 類似物 反應 混合物 以及 方法 系統 | ||
1.一種標記的核苷酸類似物,其包含:
第一親和素蛋白,其具有四個亞基,各亞基包含一個生物素結合位點;
第一核苷酸化合物,其結合至所述第一親和素蛋白,其中所述第一核苷酸化合物由結構式(I)表示:
其中
L為包括親合力調節元件的核苷酸接頭元件,其中L包括取代或未取代的烷基、雜烷基、環烷基、環雜烷基、芳基、雜芳基、多元醇、聚醚、聚胺、氨基酸、肽或糖,并且其中所述親合力調節元件包括取代或未取代的單環、雙環或三環芳香族部分;
P為多磷酸酯元件;
Nu為核苷元件;
X為多價中央核心元件,其中X包括多胺、取代的環己烷、取代的1,3,5-三嗪、取代的苯、醚鍵部分或酰基鍵部分;
B”為末端偶聯元件,其中至少一個B”包含生物素部分;
n為1至4的整數;并且
o為0或1;以及
第一染料標記的化合物,其結合至所述第一親和素蛋白,其中所述第一染料標記的化合物為結構式(IIIG)的化合物:
其中
各L’獨立地為染料化合物接頭元件,其中L’包括取代或未取代的烷基、雜烷基、環烷基、環雜烷基、芳基、雜芳基、多元醇、聚醚、聚胺、氨基酸、肽或糖;
各S獨立地為防護元件,其中S包含多個分子量為至少300的多個側鏈;
各Dye獨立地為熒光受體染料或熒光供體染料,其中所述熒光受體染料和熒光供體染料獨立地為熒光素、羅丹明類染料、或花青染料;
各B”獨立地為末端偶聯元件,其中至少一個B”包含生物素部分;
各p獨立地為0或1;并且
各r”獨立地為0至8的整數;
s為1至6的整數;并且
t為0或1。
2.根據權利要求1所述的標記的核苷酸類似物,其中所述第一染料標記的化合物和所述第一核苷酸化合物各自通過生物素部分結合至所述第一親和素蛋白。
3.根據權利要求1所述的標記的核苷酸類似物,其還包含第二親和素蛋白和第二核苷酸化合物,其中
所述第二親和素蛋白通過生物素部分結合至所述第一染料標記的化合物,并且所述第二親和素蛋白通過生物素部分結合至所述第二核苷酸化合物。
4.根據權利要求1所述的標記的核苷酸類似物,其中所述第一親和素蛋白為親和素、鏈霉親和素、蘑菇親和素、鏈霉親和素突變體、熱帶爪蟾親和素、慢生大豆根瘤菌親和素、AVR2、AVR4或它們的同源物。
5.根據權利要求1所述的標記的核苷酸類似物,其中所述親和力調節元件由結構式(II)表示:
其中
A環和B環各自獨立地為5個至7個原子的環狀結構,其中A環或B環的至少一者為芳香族;并且
A環或B環任選地包含至少一個陰離子取代基。
6.根據權利要求5所述的標記的核苷酸類似物,其中任選的至少一個陰離子取代基為-SO3H。
7.根據權利要求5所述的標記的核苷酸類似物,其中所述親和力調節元件由結構式(IIA)或(IIB)表示:
其中
A1、A2、A3和A4基團中的一者為并且其他基團為-CH2-或鍵;并且
R1為H或陰離子取代基并且R2為H或陰離子取代基。
8.根據權利要求7所述的標記的核苷酸類似物,其中所述陰離子取代基為-SO3H。
9.根據權利要求7所述的標記的核苷酸類似物,其中所述親和力調節元件由結構式(IIC)或(IIC’)表示:
10.根據權利要求7所述的標記的核苷酸類似物,其中所述親和力調節元件由下列結構式中的一者表示:
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