[發(fā)明專利]用于誘導造血細胞分化的方法和組合物有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201680018703.4 | 申請日： | 2016-01-26 |
| 公開（公告）號： | CN107429230B | 公開（公告）日： | 2021-11-12 |
| 發(fā)明（設計）人： | 巴萊姆·瓦拉莫河;萊頓·克拉克 | 申請（專利權）人： | 菲特治療公司 |
| 主分類號： | C12N5/0783 | 分類號： | C12N5/0783;C12N5/0789 |
| 代理公司： | 北京安信方達知識產(chǎn)權代理有限公司 11262 | 代理人： | 鄭霞 |
| 地址： | 美國加利*** | 國省代碼： | 暫無信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 用于 誘導 造血 細胞 分化 方法 組合 | ||
1.一種用于引導多能干細胞向造血細胞系分化的方法，包含：
(i)使多能干細胞接觸包含BMP途徑激活劑以及可選的bFGF的第一組合物，以獲得中胚層細胞；
(ii)使中胚層細胞接觸包含BMP途徑激活劑、bFGF和WNT途徑激活劑的第二組合物，以獲得具有永久造血內皮(HE)潛能的中胚層細胞；以及
(iii)使具有永久HE潛能的中胚層細胞接觸包含bFGF和ROCK抑制劑的第三組合物，以獲得永久HE細胞；
其中所述永久HE細胞能夠提供造血細胞系，其包括造血干和祖細胞(HSC)；
其中中胚層細胞和具有永久HE潛能得中胚層細胞在步驟(i)和(ii)中獲得，而不形成擬胚體；以及
其中所述多能干細胞向造血細胞系的分化不含TGFβ受體/ALK抑制劑。
2.如權利要求1所述的方法，其中該造血細胞系包括造血干和祖細胞(HSC)、造血專能祖細胞(MPP)、前-T祖細胞、前-NK祖細胞、T祖細胞、NK祖細胞、T細胞、NK細胞、NKT細胞或B細胞。
3.如權利要求1所述的方法，進一步包括：
(i)使多能干細胞接觸包含MEK抑制劑、GSK3抑制劑和ROCK抑制劑的組合物，以接種和擴增細胞；或
(ii)使多能干細胞、中胚層細胞和/或具有永久造血內皮潛能的中胚層細胞處于2％至10％的低氧張力下。
4.如權利要求1所述的方法，進一步包括：
(i)使永久HE細胞接觸包含BMP激活劑，以及可選的ROCK抑制劑，以及一種或多種選自TPO、IL3、GMCSF、EPO、bFGF、VEGF、SCF、IL6和IL11的生長因子和細胞因子的組合物，以獲得造血專能祖細胞(MPP)；或
(ii)使永久HE細胞接觸包含一種或多種選自SCF、Flt3L和IL7的生長因子和細胞因子；以及可選的ROCK抑制劑的組合物，以獲得前-T祖細胞、T祖細胞和/或T細胞；或
(iii)使永久HE細胞接觸包含一種或多種選自SCF、Flt3L、IL7和IL15的生長因子和細胞因子以及可選的一種或多種BMP激活劑、ROCK抑制劑、VEGF和bFGF的組合物，以獲得前-NK祖細胞、NK祖細胞和/或NK細胞。
5.如權利要求1所述的方法，其中
(i)多能干細胞向造血細胞系的分化處于無飼養(yǎng)條件下；或
(ii)多能干細胞向造血細胞系的分化處于無基質條件下；或
(iii)多能干細胞包括誘導性多能干細胞(iPSC)，可選地其中iPSC是初始iPSC；或
(iv)WNT途徑激活劑是GSK3抑制劑，可選地其中GSK3抑制劑是CHIR99021；或
(v)BMP途徑激活劑是BMP4。
6.如權利要求1所述的方法，其中ROCK抑制劑是：(i)Thiazovivin，或(ii)Y-27632。
7.如權利要求1所述的方法，包括：
使多能干細胞來源的前-T祖細胞接觸包含一種或多種選自SCF、Flt3L和IL7的生長因子和細胞因子的組合物，以獲得多能干細胞來源的T祖細胞或T細胞，其中組合物不含VEGF、bFGF、BMP激活劑和ROCK抑制劑中的一種或多種；
其中多能干細胞來源的前-T祖細胞通過使永久造血內皮接觸包含ROCK抑制劑，以及一種或多種選自SCF、Flt3L和IL7的生長因子和細胞因子的組合物產(chǎn)生，以允許細胞分化和擴增。
8.如權利要求7所述的方法，其中：
(a)所述方法進一步包括
使所述多能干細胞接觸包含MEK抑制劑、GSK3抑制劑和ROCK抑制劑的組合物以接種和擴增多能干細胞，其中組合物不含TGFβ受體/ALK抑制劑；或
(b)其中產(chǎn)生多能干細胞來源的T細胞系(i)不產(chǎn)生擬胚體；(ii)于單層培養(yǎng)下進行；(iii)于無飼養(yǎng)條件下進行；或(iv)于無基質條件下進行；或
(c)其中多能干細胞是iPSC或初始iPSC。
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