一株甲草胺、乙草胺、丙草胺、丁草胺單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株GHY1及其應(yīng)用，屬于食品安全免疫檢測領(lǐng)域。本發(fā)明一株甲草胺、乙草胺、丙草胺、丁草胺單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株GHY1，已保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，簡稱CGMCC，保藏編號為CGMCC No.12030。所述單克隆抗體，由所述保藏編號為CGMCC No.12030的甲草胺、乙草胺、丙草胺、丁草胺單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株GHY1分泌產(chǎn)生。此細(xì)胞株分泌的單克隆抗體，對甲草胺、乙草胺、丙草胺、丁草胺具有較好的特異性和檢測靈敏度，可實(shí)現(xiàn)對水、果蔬、谷物中甲草胺、乙草胺、丙草胺、丁草胺殘留量的檢測，具有實(shí)際應(yīng)用價值。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一株甲草胺、乙草胺、丙草胺、丁草胺單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株GHY1及其應(yīng)用，屬于食品安全免疫檢測領(lǐng)域。

背景技術(shù)

甲草胺、乙草胺、丙草胺、丁草胺都是廣泛生產(chǎn)和使用的酰胺類除草劑，不僅涉及環(huán)境污染的監(jiān)測，還與作物藥害預(yù)防等有關(guān)。由于酰胺類除草劑具有中等到較高的水溶性及相對較低的土壤吸附常數(shù)，所以施用到水稻田的除草劑易通過滲透轉(zhuǎn)移到淺層地下水或隨雨水徑流進(jìn)入地表水，會對漁業(yè)生產(chǎn)和生態(tài)環(huán)境造成不良影響。其中乙草胺用藥成本低，使用廣泛，在大豆、花生、玉米等多種農(nóng)作物上施用，是使用面積最大的旱地土壤處理選擇性除草劑之一，產(chǎn)量與使用量僅次于草甘膦。但乙草胺降解周期較長，在水體和土壤環(huán)境中易遷移，而且其代謝產(chǎn)物醌亞胺具有致癌作用。在環(huán)境問題和食品安全日益嚴(yán)峻的今天，為了方便農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥的殘留檢測，建立針對甲草胺、乙草胺、丙草胺、丁草胺的快速、準(zhǔn)確和靈敏的檢測方法很有必要。

目前檢測甲草胺、乙草胺、丙草胺、丁草胺色譜法應(yīng)用最為廣泛，包括氣相色譜法(GC)、高效液相色譜法(HPLC)、氣質(zhì)聯(lián)用(GC-MS)、液質(zhì)聯(lián)用 (LC-MS)、超臨界流體色譜(SFC)、毛細(xì)管電泳(CE)等的儀器方法，但這些方法需要昂貴的儀器、專業(yè)的操作人員，且樣品前處理復(fù)雜，成本高，時間長，不能實(shí)現(xiàn)大量樣品的快速檢測，因此建立快速簡便的甲草胺、乙草胺、丙草胺、丁草胺檢測方法具有重要意義。酶聯(lián)免疫法（ELISA）是一種極為高效、敏感、快速的檢測方法，檢測時對樣本的純度要求不高而且操作簡便，適用于大量樣本的現(xiàn)場快速檢測。建立高效的免疫學(xué)檢測方法，篩選高特異性的單克隆單體是重要前提。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一株甲草胺、乙草胺、丙草胺、丁草胺單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株，由該細(xì)胞株制備的抗體對甲草胺、乙草胺、丙草胺、丁草胺具有較好特異性和檢測靈敏度，可以用來建立甲草胺、乙草胺、丙草胺、丁草胺的免疫學(xué)檢測方法。

本發(fā)明的技術(shù)方案，一株甲草胺、乙草胺、丙草胺、丁草胺單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株GHY1，已保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，簡稱CGMCC，保藏編號為CGMCC No.12030。

所述甲草胺、乙草胺、丙草胺、丁草胺單克隆抗體，它由所述保藏編號為CGMCC No.12030的甲草胺、乙草胺、丙草胺、丁草胺單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株GHY1分泌產(chǎn)生。

所述甲草胺、乙草胺、丙草胺、丁草胺單克隆抗體的應(yīng)用：用于食品安全檢測中甲草胺、乙草胺、丙草胺、丁草胺殘留的分析檢測。

本發(fā)明提供的甲草胺、乙草胺、丙草胺、丁草胺單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株GHY1的制備基本步驟為：

（1）半抗原的合成：

將乙草胺（1g，3.7mmol），3-巰基丙酸（1.2g 11.1mmol）和氫氧化鉀（0.4g，7.4mmol）在乙醇（20mL）中的溶液在70℃下攪拌過夜。將溶液過濾并通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)干燥。 將產(chǎn)物再溶解于20mL 5％NaHCO₃溶液中并過濾。 用6mol / L HCl將pH調(diào)節(jié)至3.0，并將溶液用乙酸乙酯（20mL×3）萃取。將萃取溶液濃縮，得到粗產(chǎn)物，將其通過制備型HPLC純化，得到半抗原（130mg）AMPA。