技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于腫瘤分子生物學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種腫瘤標(biāo)志物EBP50在預(yù)測(cè)宮頸癌預(yù)后中的應(yīng)用，及EBP50作為宮頸癌標(biāo)志物在制備分子靶向藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

宮頸癌是女性常見的惡性腫瘤。2012年全球新發(fā)宮頸癌528 000例，死亡266 000例，其中85％宮頸癌發(fā)生于發(fā)展中國(guó)家。我國(guó)是宮頸癌第二高發(fā)國(guó)家，每年新發(fā)病例約13.15萬，占全球新發(fā)病例的28.7％，死亡人數(shù)占全球死亡病例的三分之一，并呈年輕化趨勢(shì)。可見宮頸癌已嚴(yán)重威脅到我國(guó)婦女的身體健康。目前在國(guó)內(nèi)部分地區(qū)施行的早期宮頸篩查有助于及時(shí)發(fā)現(xiàn)宮頸病變而開展治療，阻斷宮頸病變向?qū)m頸癌的惡性轉(zhuǎn)化。但對(duì)于偏遠(yuǎn)貧困地區(qū)，早期篩查工作并不能完全覆蓋，而患者一旦確診往往已處于宮頸癌中晚期階段，并且治療效果較差。

相較于其他惡性腫瘤而言，宮頸癌通過早期篩查，如TCT(Thinprepcytologic test，新柏氏液基細(xì)胞學(xué)技術(shù))細(xì)胞學(xué)檢測(cè)、HPV檢測(cè)、陰道鏡檢查以及宮頸組織病理學(xué)檢查等方法可發(fā)現(xiàn)宮頸病變。在我國(guó)預(yù)防及醫(yī)療條件較差的地區(qū)，患者就診時(shí)多已經(jīng)發(fā)現(xiàn)宮頸細(xì)胞癌變，在宮頸癌癥狀出現(xiàn)三個(gè)月后才就診的患者中約有三分之二已發(fā)展為癌癥晚期。宮頸癌的手術(shù)切除治療常常由于腫瘤的轉(zhuǎn)移而不能徹底切除腫瘤組織，使得臨床治療比較困難，術(shù)后也常常復(fù)發(fā)(浸潤(rùn)性宮頸癌5年生存率僅為20％-50％、術(shù)后復(fù)發(fā)率約35％)；放射治療又因腫瘤轉(zhuǎn)移而必須擴(kuò)大照射范圍，相應(yīng)地增加了對(duì)正常機(jī)體的損傷，影響預(yù)后。所以，有效地預(yù)測(cè)宮頸癌的預(yù)后及尋找新型腫瘤分子靶向藥物作為主要治療手段顯得尤為重要。

發(fā)展新型宮頸癌標(biāo)志物作為預(yù)后指標(biāo)與新型治療靶點(diǎn)一直是宮頸癌研究的熱點(diǎn)。

宮頸癌的手術(shù)切除治療常常由于腫瘤的轉(zhuǎn)移而不能徹底切除腫瘤組織，使得臨床治療比較困難，術(shù)后也常常復(fù)發(fā)(浸潤(rùn)性宮頸癌5年生存率僅為20％-50％、術(shù)后復(fù)發(fā)率約35％)。因此，預(yù)測(cè)宮預(yù)后并進(jìn)行相應(yīng)的輔助治療是宮頸癌研究急需解決的的重大科學(xué)問題。腫瘤標(biāo)志物的發(fā)現(xiàn)和合理應(yīng)用是腫瘤預(yù)測(cè)預(yù)后和輔助治療的前提。因此對(duì)于找出更好的宮頸癌預(yù)后分子標(biāo)志物，也為宮頸癌的分子靶向治療提供了重要的理論依據(jù)。

迄今為止，尚未見有效地預(yù)測(cè)宮頸癌預(yù)后的可供臨床應(yīng)用的分子標(biāo)志物。以EBP50作為標(biāo)志物用于宮頸癌檢測(cè)的試劑和方法，都將為深入研究和大規(guī)模驗(yàn)證EBP50與宮頸癌的相關(guān)性，對(duì)宮頸癌預(yù)測(cè)預(yù)后情況及為個(gè)體患者提供輔助治療方案具有重要的臨床意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供EBP50的新用途。本發(fā)明提供了EBP50作為宮頸癌預(yù)后分子標(biāo)志物的用途，以及以EBP50為靶標(biāo)篩選輔助治療宮頸癌藥物的應(yīng)用，為宮頸癌預(yù)后和治療提供參考依據(jù)。

本發(fā)明提供了EBP50作為宮頸癌標(biāo)志物的用途，主要針對(duì)宮頸癌。

分析比較宮頸癌組織樣本與正常對(duì)照樣本中EBP50的表達(dá)量。

本發(fā)明的部分實(shí)驗(yàn)結(jié)果用基因富集分析(Gene set enrichment analysis，GSEA)研究EBP50在宮頸癌病人中發(fā)揮的生物學(xué)功能，執(zhí)行1000次的置換檢驗(yàn)，計(jì)算FDR值，F(xiàn)DR<0.05認(rèn)為具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

采用Pull down和Co-IP驗(yàn)證EBP50突變體DD與EGFR相互作用能力。

采用western blot檢測(cè)EGFR和ERK磷酸化的情況，發(fā)現(xiàn)EBP50在宮頸癌HeLa細(xì)胞中明顯抑制EGFR及下游的ERK的磷酸化水平。實(shí)驗(yàn)結(jié)果與生物信息學(xué)結(jié)果一致，表明EBP50能夠調(diào)節(jié)EGFR/ERK信號(hào)通路。從另一個(gè)角度說明，本發(fā)明中EBP50可以作為篩選宮頸癌藥物的新靶點(diǎn)。

K-M生存曲線分析結(jié)果顯示：EBP50低表達(dá)的患者預(yù)后不良，提示其同樣可以作為新的宮頸癌預(yù)后分子標(biāo)志物。

附圖說明

圖1是宮頸癌組織中EBP50蛋白表達(dá)下調(diào)并促進(jìn)細(xì)胞增殖和周期圖

圖2是宮頸癌中EBP50表達(dá)與EGFR-ERK通路活性負(fù)相關(guān)圖

圖3是EBP50突變體DD削弱了與EGFR結(jié)合能力圖

圖4是EBP50突變體DD削弱對(duì)EGFR-ERK通路抑制能力圖

圖5是EBP50表達(dá)可以預(yù)測(cè)宮頸癌病人預(yù)后圖

具體實(shí)施方法

實(shí)施例一：分析宮頸癌組織和正常組織中EBP50蛋白的表達(dá)變化

(一)材料和方法