技術領域

本發明屬生物制藥領域，涉及影響血管平滑肌細胞鈣化模型建立進程的新的抑制劑—大電導鈣激活鉀通道(又稱BK通道)開放劑NS1619的新的用途，具體涉及NS1619在用于建立血管平滑肌細胞鈣化模型中的用途，尤其是NS1619在用于制備抑制血管平滑肌細胞鈣化中的新用途。

背景技術

CKD-MBD(chronic kidney disease-mineral and bone disorder)是指由慢性腎臟病引起的礦物質和骨代謝系統性紊亂。現有技術公開了血管鈣化是CKD的常見并發癥，各期CKD患者均存在程度不等的鈣磷代謝紊亂，由此所引起的血管鈣化是CKD患者晚期心血管事件死亡的獨立危險因素，約有30-65％慢性腎病3-5期患者及50-80％5期患者會出現血管鈣化。一般血管鈣化發生在兩個位點：內膜和中層，在成年慢性腎病(CKD)患者中，血管壁鈣化幾乎都是在中層。目前業內研究人員認為許多因素都參與了血管鈣化的發病過程，提出了骨形成蛋白調節學說、細胞控制學說、凋亡體基質囊泡學說和氧化應激學說等多種假說。

研究報道，大電導鈣激活的鉀通道(BK通道)廣泛分布于各種類型的細胞中，尤其在平滑肌細胞、神經元和內分泌細胞等興奮性細胞中表達豐富。研究顯示，BK通道受膜電位和細胞內Ca²⁺濃度雙重調節，是細胞興奮性，肌肉收縮和遞質釋放等多種生理過程的強大調節器。有研究顯示，BK通道的激活、失活和變異與多種疾病調節有關，例如：作為血管平滑肌細胞膜上的優勢離子通道，BK通道的激活和表達增加能夠平衡高血壓時冠脈張力的上升，增強平滑肌細胞舒張功能適應性；在固有免疫中，阻斷BK通道使微生物殺傷和消化過程受到抑制；在若干種腫瘤的發生過程中，BK通道抑制腫瘤細胞增殖，影響其遷移，表現出抗腫瘤的特性，在神經系統中，激活的BK通道對神經細胞有保護作用。

NS1619是BK通道開放劑的一種，目前尚未見關于NS1619具有抑制血管平滑肌細胞鈣化的作用的報道。

發明內容

本發明的目的是提供大電導鈣激活鉀通道(BK)開放劑NS1619的新的用途，涉及NS1619在用于建立血管平滑肌細胞鈣化模型中的用途，尤其是NS1619在用于制備抑制血管平滑肌細胞鈣化制劑中的新用途。

本發明通過細胞實驗，證實了NS1619能顯著抑制血管平滑肌細胞的鈣沉積，抑制鈣化進程中的標志蛋白，以及進一步產生的抑制血管平滑肌細胞鈣化的用途。

本發明所述的NS1619是BK通道開放劑的一種，通過市購的渠道獲得。

本發明通過培養和鑒定原代血管平滑肌細胞；通過分別使用正常DMEM培養基(對照組)、含鈣化誘導劑(10mMβ-GP+3.6mM Ca²⁺)的DMEM培養基(鈣化組)、含鈣化誘導劑(10mMβ-GP+3.6mM Ca²⁺)及20μM NS1619的DMEM培養基(NS1619作用組)、含20μM NS1619的DMEM培養(NS1619對照組)基對原代血管平滑肌細胞進行培養，建立鈣化模型；通過鈣沉積檢測試劑盒檢測各組中血管平滑肌細胞沉積的Ca²⁺的含量；通過ALP試劑盒檢測各組血管平滑肌細胞鈣化的前體分子ALP的表達量的變化；通過Real Time PCR檢測RNA水平各組血管平滑肌細胞鈣化標志蛋白Runx2,OCN,OPN的表達量變化；通過茜素紅染色實驗對各組血管平滑肌細胞的鈣結節染色，顏色深淺反應鈣化的程度；經細胞生物學實驗結果證明，NS1619具有以下抑制血管平滑肌細胞鈣化的作用：

1、抑制鈣化進程中Ca²⁺的沉積；

2、抑制鈣化前體標志分子ALP的表達；

3、抑制RNA水平鈣化標志分子OCN,OPN的表達；

4、抑制鈣結節的產生，從而抑制血管平滑肌鈣化進程。

本發明經細胞實驗結果證明，NS1619具有抑制血管平滑肌細胞鈣化的作用，包括抑制鈣化進程中Ca²⁺的沉積的作用；抑制鈣化標志分子表達的作用；抑制鈣結節產生的作用。

本發明所述的NS1619進一步可用于制備治療血管硬化及平滑肌收縮舒張功能紊亂相關疾病的藥物，包括治療動脈粥樣硬化、哮喘、腦缺血損傷、尿潴留等平滑肌功能紊亂相關疾病。