技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明涉及一種用兩性株自交制備純合親本進(jìn)行雜交育種的方法，特別涉及一種用蘆筍雄性兩性株自交制備純合親本與超雄進(jìn)行雜交育種的方法，屬雜交育種技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

蘆筍(Asparagusofficinalis)是雌雄異株的單子葉植物，一般蘆筍雌株只開雌花，雄株只開雄花，主要是因為花在發(fā)育過程中由兩性部分?jǐn)∮D(zhuǎn)變?yōu)閱涡裕创浦?mm)中的雄蕊發(fā)生了退化，雄株(Mm)中的子房和柱頭停止了生長和分化。因此，雌株結(jié)果實產(chǎn)生種子，雄株不結(jié)果實。自然界中有些雄株的雌蕊退化不完全而雌性恢復(fù)育性，會結(jié)出少量的果實，形成種子，這樣的植株稱為雄性兩性株(基因型亦為Mm)，俗稱兩性株。兩性株通過自交可獲得理論上1/4基因型為MM的雄株，稱為超雄株，一般情況，雄株應(yīng)不產(chǎn)生果實和種子，其產(chǎn)量在三年后要比雌株的產(chǎn)量高，因而將超雄(MM)作為父本進(jìn)行蘆筍全雄育種(mm×MM→Mm，后代全部為雄株)能夠顯著提高蘆筍的產(chǎn)量。雖然國內(nèi)外目前對于蘆筍性別分化、開花習(xí)性等方面進(jìn)行過研究，但國內(nèi)外均沒有利用蘆筍兩性株特性進(jìn)行雜交育種的方法。

本發(fā)明提供的用兩性株自交制備純合親本進(jìn)行雜交育種的方法，經(jīng)文獻(xiàn)檢索，未見與本發(fā)明相同的公開報道。

發(fā)明內(nèi)容：

本發(fā)明的目的在于提供一種用兩性株自交制備純合親本進(jìn)行雜交育種的方法，為我國蘆筍種質(zhì)資源的利用與改良提供有效的方法。

本發(fā)明選擇蘆筍雄株兩性株，在兩性株的兩性花開花前強(qiáng)行進(jìn)行人工自交，待自交的種子成熟后收獲，播種后，再次選取雄株兩性株，對兩性株上的兩性花進(jìn)行人工自交，并收獲自交種子。如此將兩性株自交3～4代，獲得純合的雌株與超雄株。將純合的超雄株與純合的雌株進(jìn)行人工雜交，獲得雜交種。同時，將純合的超雄株與純合的雌株通過組織培養(yǎng)的方式進(jìn)行性狀固定。將雜交種子播種，最終獲得雜交蘆筍品種。為我國蘆筍種質(zhì)資源的利用與改良提供了一條有效的途徑。

本發(fā)明的用兩性株自交制備純合親本進(jìn)行雜交育種的方法，其具體步驟如下：

1、蘆筍兩性株的選取與開花觀察

在蘆筍大棚中，待蘆筍開始開花時，選取出現(xiàn)花朵中雌蕊退化不完全的雄性植株，掛牌標(biāo)記；將雌蕊退化不完全的雄性植株花朵摘下，在解剖鏡下觀察其雌蕊結(jié)構(gòu)，判定其雌性育性是否恢復(fù)，若恢復(fù)則繼續(xù)觀察，若未恢復(fù)則不予選取；對于初步鑒定的植株，繼續(xù)觀察其后續(xù)開花情況，如果仍然會出現(xiàn)部分花朵中雌蕊退化不完全，恢復(fù)其雌性育性時，則將該植株標(biāo)記為兩性株；

2.雜交育種的實施

(1)兩性花選擇與自交

選擇生長健壯、無病無害的雄性兩性株，做好標(biāo)識；根據(jù)所選擇的兩性株及其開花習(xí)性，選擇兩性花進(jìn)行自交并做好標(biāo)記；待自交的花朵結(jié)出果實并成熟后，收獲種子保存；

(2)兩性花自交種播種與自交純化

將通過自交獲得的兩性株種子播種，經(jīng)苗期和成株期，在成株期現(xiàn)蕾或開花時，找到雄株兩性株(該世代兩性株的比例理論上高于上一個世代)，對兩性花進(jìn)行自交，避免其他花的傳粉，并做好標(biāo)記；待自交的花朵結(jié)出果實并成熟后，收獲種子，再次進(jìn)行上述方式的播種與自交，如此自交3個世代后，得到純合的自交種子；

(3)雜交與雜交種的獲得

將獲得的自交3個世代后的純合的自交種子播種，待其長至成株期；在成株期現(xiàn)蕾或開花時，在田間找到雌株與超雄株；在上午的7:30，將超雄株的剛開放的花摘下，用鑷子輕輕敲打花藥，將花藥收集在一個玻璃杯內(nèi)；隨即用毛筆蘸刷花藥在純合雌株的雌花柱頭上，由于蘆筍開花是按照蘆筍枝條自上而下的特點，枝條上花朵不會在同一天開花，因此授粉工作需要做6天，以滿足雜交量的需要；完成人工輔助授粉后，將授粉后的花朵標(biāo)記并套上牛皮紙袋子直到種子成熟；

(4)雜交后的管理

雜交之后，為防止授粉枝條上還有其他花長出，影響雜交種子坐果和收獲，每隔兩天將新長出的花立即摘除，共檢查5次。在雜交期間，為保證授粉花朵正常發(fā)育，需經(jīng)常檢查；

(5)收獲管理

在雜交種子成熟(果實變紅)時，將雜交的果實摘下，放在牛皮紙袋中，置于陽光下曬2天，后取出果實中的種子，置于干燥的牛皮紙袋中。

本發(fā)明的有益效果在于：

1、提供的用兩性株自交制備純合親本進(jìn)行雜交育種的方法，是用于蘆筍雜交育種的一種新技術(shù)，為我國蘆筍種質(zhì)資源的利用與改良提供有效的方法。

2、本方法易操作、蘆筍雜交育種效果佳。

具體的實施例：

下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的詳述。實施例所用方法同發(fā)明內(nèi)容部分描述。