本發明公開了一種皮膚特異表達綿羊Wnt10b基因的表達盒、載體及應用。本發明所提供了一種DNA分子，自上游至下游依次包括綿羊毛囊組織特異性啟動子KAP6.1和綿羊Wnt10b基因；所述綿羊Wnt10b基因編碼序列表的序列3所示的綿羊Wnt10b蛋白；所述綿羊毛囊組織特異性啟動子KAP6.1如序列表的序列1自5’末端第9至1531位核苷酸所示。本發明所提供了相應的表達盒和載體，能夠在動物皮膚中特異性表達綿羊Wnt10b基因，提高動物的毛囊密度，進而提高產毛量。本發明為進一步研究Wnt10b基因在毛囊發育和周期性變化過程中的作用機制奠定基礎。

技術領域

本發明屬于生物工程技術領域，涉及一種皮膚特異表達綿羊Wnt10b基因的表達盒、載體及應用。

背景技術

羊毛的生長受多種因素影響，毛囊是毛纖維的“發源地”，因此毛囊的生長發育和性狀決定著羊毛的品質和產量。綿羊毛囊在胚胎期形成，表皮細胞和真皮細胞在一系列復雜的信號因子調控下，促使上皮細胞和真皮細胞增殖、分化并逐漸形成完整毛囊結構。近年來研究發現，Wnt10b作為“第一表皮信號”在小鼠毛囊形成初始階段即表達于毛基板，同時伴隨著毛囊發育持續表達。體外分離培養小鼠未分化的真皮乳頭細胞，發現Wnt10b蛋白通過經典Wnt通路，誘導未成熟的表皮細胞向毛干及內根鞘細胞分化，同時具有維持毛乳頭細胞的生物活性并維持毛干生長的能力。Wnt10b蛋白在毛囊中特異性表達于毛母質細胞中，可使體外培養毛囊由靜止期向生長期轉化。在絨山羊全年毛囊生長過程中發現，Wnt10b在絨山羊毛囊中特異性地表達于毛母質細胞中，且在毛囊生長過程中呈周期性表達。雖然大量研究表明Wnt10b能夠啟動毛囊發育和再生，但是其作用機理尚不明確。

發明內容

本發明的目的是提供一種皮膚特異表達綿羊Wnt10b基因的表達盒、載體及應用。

本發明首先提供了一種DNA分子，自上游至下游依次包括綿羊毛囊組織特異性啟動子KAP6.1和綿羊Wnt10b基因。

所述綿羊Wnt10b基因編碼序列表的序列3所示的綿羊Wnt10b蛋白。

所述綿羊Wnt10b基因具體可如序列表的序列2自5’末端第16至1188位核苷酸所示。

所述綿羊毛囊組織特異性啟動子KAP6.1具體可如序列表的序列1自5’末端第9至1531位核苷酸所示。

所述DNA分子中，在所述綿羊Wnt10b基因的起始密碼子前還可具有kozak序列；所述kozak序列具體如序列表中序列2的自5’末端第10至15位核苷酸所示。

所述DNA分子中，在所述綿羊Wnt10b基因的下游還具有熒光標記基因；所述熒光標記基因具體為EGFP基因；所述EGFP基因具體可為pcDNA3.1-EGFP載體中的EGFP基因。

含有所述DNA分子的載體也屬于本發明的保護范圍。

在本發明中，所述載體具體為將所述綿羊毛囊組織特異性啟動子KAP6.1插入到pcDNA3.1-EGFP載體的酶切位點MluI和NheI之間，并將所述綿羊Wnt10b基因插入到所述pcDNA3.1-EGFP載體的酶切位點NheI和EcoRI之間得到的重組質粒。

所述DNA分子或所述載體在如下任一中的應用也屬于本發明的保護范圍：

(a)表達綿羊Wnt10b基因；

(b)制備在動物皮膚中特異性表達綿羊Wnt10b基因的產品；

(c)促進動物皮膚毛囊密度增加；

(d)制備用于促進動物皮膚毛囊密度增加的產品；

(e)提高動物產毛量；

(f)制備用于提高動物產毛量的產品。