技術領域

本發明屬于生物工程技術領域，涉及一個蛋白的應用，尤其涉及一種AKR1C1蛋白的應用。

背景技術

肺癌的發病率逐年增高，2012年起已經成為我國患病率和死亡率最高的惡性腫瘤。據美 國國家癌癥中心統計，79％的肺癌患者就診時處于已出現轉移的Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期病情；肺癌 病人的死亡人數占所有癌癥病人死亡人數的26.8％，2005-2011年的5年存活率僅為17.4％。 這說明肺癌病人的轉移情況和預后存活情況密切相關。這些數據說明，肺癌的臨床研究，特 別是轉移相關研究，具有很大的實際意義與臨床需求。

人AKR1C1蛋白是由AKR1C1基因(GenebankNo.NM001353.5)編碼而來，是醛酮還原酶AKR 蛋白超家族成員之一。目前該蛋白的功能尚未被完全探明，只清楚AKR1C1蛋白能夠利用 NADH/NADPH作為輔酶，將醛酮轉換為相應的醇類。文獻報道，AKR1C1在腫瘤組織中表達異常， 比如在肺癌中表達升高。AKR1C1蛋白與腫瘤耐藥有一定的關系，但尚無關于AKR1C1蛋白在轉 移中的研究報道，尤其是在肺癌轉移中的研究報道。

發明內容

本發明的目的之一是提供一種AKR1C1蛋白在制備診斷肺癌和預測肺癌轉移的產品中的 應用。所述的產品包括：用RT-PCR、實時定量PCR、免疫檢測、原位雜交或基因芯片診斷肺 癌和預測肺癌轉移的產品。所述AKR1C1蛋白的序列如SEQIDNO.1所示(Aldo-ketoreductase family1memberC1醛酮還原酶，geneID1645，由323個aa編碼)。

所述用RT-PCR診斷肺癌和預測肺癌轉移的產品至少包括一對特異性擴增AKR1C1基因的 引物：AKR1C1正向引物：5'-agtaaagctttagaggccac-3'；反向引物：5'-cacccatgg ttcttctcgg-3'，擴增產物為591bp。

所述用實時定量PCR診斷肺癌和預測肺癌轉移的產品至少包括一對特異性擴增AKR1C1基 因的引物：AKR1C1正向引物：5'-gtaaagctttagaggccac-3'；反向引物：5'-gaggtc aacataatccaattg-3'，擴增產物為245bp。

所述用免疫檢測診斷肺癌和預測肺癌轉移的產品包括：與AKR1C1蛋白特異性結合的抗體。

所述用原位雜交診斷肺癌和預測肺癌轉移的產品包括：與AKR1C1基因的核酸序列雜交的 探針。

所述用基因芯片診斷肺癌和預測肺癌轉移的產品包括：與AKR1C1基因的核酸序列雜交的 探針。

本發明所述的AKR1C1蛋白可作為肺癌診斷的標記物，提高肺癌診斷和預測肺癌轉移的準 確性。

在本發明中，可以使用一系列本領域已知的方法來制備針對AKR1C1蛋白特異的抗體。例 如，將純化的人AKR1C1蛋白或它的抗原片段注射入動物體內以產生多克隆抗體。同樣，表達 人AKR1C1蛋白或它的抗原片段的細胞也可以用來對動物致免疫而產生抗體。根據本發明制備 的抗體也可以是單克隆抗體，這些單克隆抗體可用雜交瘤技術制備。本發明的抗體包括可以 阻抑AKR1C1功能的抗體，也可以是不影響人AKR1C1蛋白功能的抗體。每一類抗體都可以通 過對人AKR1C1蛋白的片斷或功能域致免疫而產生，而人AKR1C1蛋白產物及其片段可以用重 組方法產生或用多肽合成儀進行合成。與非修飾形式的AKR1C1蛋白結合的抗體，可以利用在 原核細胞例如E.coli中產生的基因產物來免疫動物而得到。與翻譯后修飾形式如糖基化或 磷酸化AKR1C1蛋白或多肽結合的抗體，可以利用在真核細胞如酵母或昆蟲細胞中產生的基因 產物來免疫動物而得到。

在本發明中，所述探針可以是DNA、RNA、DNA-RNA嵌合體、PNA或其他衍生物。所述探 針的長度沒有限制，只要能夠完成特異性雜交、與目的核苷酸序列特異性結合，任何長度都 可以。所述探針的長度可以短至25、20、15或10個堿基長度。同樣，所述探針的長度可長 至60、80、100、150、300個堿基對或更長，甚至整個基因。由于不同的探針長度對雜交效 率、信號特異性有不同的影響，所述探針的長度通常至少是14個堿基對，最長一般不超過 30個堿基對，與目的核苷酸序列互補的長度以15-25個堿基對最佳。所述探針自身互補序列 最好少于4個堿基對，以免影響雜交效率。