[發明專利]載脂蛋白-Ⅲ及其功能、制備方法和應用有效
| 申請號: | 201610125096.3 | 申請日: | 2016-03-04 |
| 公開(公告)號: | CN107151267B | 公開(公告)日: | 2020-05-01 |
| 發明(設計)人: | 張嶸;張景海 | 申請(專利權)人: | 本溪通用生物醫藥技術有限公司 |
| 主分類號: | C07K14/775 | 分類號: | C07K14/775;C07K19/00;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/30;C07K1/22;C07K1/20;C07K1/18;C07K1/16;C12N15/63;C07K16/18;G01N33/68;G01N33/569;A61K38/17 |
| 代理公司: | 沈陽杰克知識產權代理有限公司 21207 | 代理人: | 靳玲 |
| 地址: | 117004 遼寧省本溪市石橋子鎮木蘭路*** | 國省代碼: | 遼寧;21 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | 脂蛋白 及其 功能 制備 方法 應用 | ||
1.天然載脂蛋白-Ⅲ,其特征在于:氨基酸序列如SEQ ID:2所示。
2.如權利要求1所述的天然載脂蛋白-Ⅲ,其特征在于:編碼氨基酸序列的基因序列如SEQ ID:1所示。
3.天然載脂蛋白-Ⅲ衍生物或類似物、重組載脂蛋白-Ⅲ、重組載脂蛋白-Ⅲ衍生物或類似物,其特征在于:選自:Met-載脂蛋白-Ⅲ成熟肽、Met-組氨酸標簽-載脂蛋白-Ⅲ成熟肽、Met-載脂蛋白-Ⅲ成熟肽-His6標簽、Met-His6標簽-凝血酶酶切位點-載脂蛋白-Ⅲ成熟肽、Met-GST標簽-凝血酶酶切位點-載脂蛋白-Ⅲ成熟肽、Met-載脂蛋白-Ⅲ成熟肽-凝血酶酶切位點-GST標簽、Met-His6標簽-載脂蛋白-Ⅲ全序列、Met-載脂蛋白-Ⅲ全序列-His6標簽、Met-GST標簽-凝血酶酶切位點-ApoLpⅢ全序列、Met-ApoLpⅢ全序列-凝血酶酶切位點-GST標簽,所述天然載脂蛋白-Ⅲ衍生物或類似物或活性片段、重組載脂蛋白-Ⅲ、重組載脂蛋白-Ⅲ衍生物或類似物或活性片段的核苷酸序列是SEQ ID NO:1,氨基酸序列是SEQ ID:2。
4.如權利要求1或2所述的天然載脂蛋白-Ⅲ的制備方法,其特征在于:利用鱗翅目天蠶蛾科昆蟲的血淋巴,以昆蟲血液或血細胞裂解物和淋巴液的混合物、昆蟲壓榨或勻漿的體液作為分離純化的原料液;該原料液經過單獨的離子交換層析或疏水層析或親和層析或凝膠過濾或鹽析或超濾分離純化載脂蛋白-Ⅲ活性組分;再通過離子交換層析、疏水層析、親和層析、凝膠過濾、鹽析或超濾分離純化方法中的兩個或多個的組合以及其分離純化方法順序的重排組合,分離純化獲得載脂蛋白-Ⅲ的純度可以到達電泳純乃至HPLC純,所述的離子交換層析、疏水層析、親和層析、凝膠過濾、鹽析或超濾方法中(1)操作溫度在0℃-45℃;(2)溶液的酸堿度在pH2-pH10;(3)調節溶液酸堿度的試劑是常規、通用的酸、堿、酸溶液或堿溶液;(4)緩沖液是常規、通用緩沖離子對緩沖液;(5)溶液或緩沖液的離子強度在0.001mol/L-0.5mol/L。
5.如權利要求1或2所述的天然載脂蛋白-Ⅲ的制備方法,其特征在于:利用鱗翅目天蠶蛾科昆蟲的血淋巴,以昆蟲血液或血細胞裂解物和淋巴液的混合物、昆蟲壓榨或勻漿的體液作為分離純化的原料液;該原料液經過單獨的離子交換層析或疏水層析或親和層析或凝膠過濾或鹽析或超濾分離純化載脂蛋白-Ⅲ活性組分;再通過離子交換層析、疏水層析、親和層析、凝膠過濾、鹽析或超濾分離純化方法中的兩個或多個的組合以及其分離純化方法順序的重排組合,分離純化獲得載脂蛋白-Ⅲ的純度可以到達電泳純乃至HPLC純,所述的離子交換層析、疏水層析、親和層析、凝膠過濾、鹽析或超濾方法中(1)操作溫度在0℃-10℃;(2)溶液的酸堿度在pH4-pH9;(3)調節溶液酸堿度的試劑為酸溶液或堿溶液,酸或酸溶液為HCl、HAc、磷酸、檸檬酸、硫酸、硼酸或它們的溶液,堿或堿溶液為NaOH、KOH、Tris、檸檬酸鈉或鉀鹽、磷酸鈉或鉀鹽、硼砂或它們的溶液;(4)緩沖液是檸檬酸根緩沖離子對、HCl-Tris緩沖離子對、檸檬酸根-磷酸根緩沖離子對、磷酸根緩沖離子對、醋酸根緩沖離子對、硼酸根緩沖離子對、硼酸-Tris緩沖離子對或上述各緩沖離子的組合;(5)溶液或緩沖液的離子強度在0.01mol/L-0.1mol/L。
6.如權利要求4或5所述的制備方法,其特征在于,所述的鱗翅目天蠶蛾科昆蟲,選自柞蠶、蓖麻蠶、天蠶、印度柞蠶、琥珀蠶、美國柞蠶、樗蠶、大山蠶、美洲天蠶、樟蠶、楓蠶,所述的昆蟲為任何地域的天然或人工放養或人工飼養的昆蟲。
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