技術領域

本發明涉及檢驗微生物培養領域，具體涉及一種李斯特菌選擇培養基。

背景技術

微生物培養是一種用人工方法使微生物生長繁殖的技術，而選擇性培養基是用來促進或抑制一定類型的生物體（如細胞或細菌等）而設計的培養基，利用這種培養基可以將所需要的微生物從混雜的微生物中分離出來。李斯特菌（Listeriamonocytogenes）為革蘭陽性桿菌，是一種兼性厭氧細菌，廣泛分布在自然環境中，如土壤、污水、飼料、動物、健康人及各種生食和即食食品中，可引起人類李斯特菌病，李斯特菌是一種細胞內寄生菌，多數感染李斯特菌病的健康人沒有癥狀或有自限性的流感樣癥狀和胃腸道癥狀，如頭痛、發熱、寒戰、肌肉疼痛、腹痛、腹瀉、惡心、嘔吐等。部分患者會發展為神經系統感染（如腦膜炎、腦膜腦炎、腦干腦炎等）、敗血癥及局灶感染（如心內膜炎、關節炎、肝炎、皮炎等）和菌血癥等。神經系統的感染可能造成后遺癥。孕婦感染后多無癥狀或癥狀輕微，但可導致流產、死胎、早產及嚴重的新生兒感染。

近年來李斯特菌感染患者呈上升趨勢，在新生兒、妊娠婦女、40歲以上及免疫功能受損的人群中均可發生，尤其是妊娠婦女感染李斯特菌的風險是普通人群的30～100倍。早期診斷并早期治療，可100%治愈。若診斷延誤，病死率可達20～30%，因此作為確診唯一依據的臨床細菌檢查的正確與快速鑒定極為重要。目前，該菌屬的鑒定金標準為熒光定量PCR鑒定，但是PCR檢測設備要求和操作成本均較高，因此臨床檢驗手段主要是革蘭染色法，但有1/3的李斯特菌無法陽性檢出，而且如果要辨別李斯特菌的種類就需要細菌培養，并就其菌落形態特征進行鑒別。目前培養多用胰酪胨大豆瓊脂（TSA-YE）。但是李斯特菌培養陽性率低，僅為36%左右，主要是臨床培養過程中該菌容易被認為是污染的雜菌而遭丟棄，且標本中的金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、肺炎球菌等在目前的培養基上比李斯特菌生長更快，很快覆蓋了培養基，李斯特菌無法生長，結果延誤診療時間。

發明內容

本發明的技術任務是針對以上現有技術的不足，提供一種適合于李斯特菌的選擇培養基。

本發明解決其技術問題的技術方案是：一種李斯特菌的選擇培養基，其特征為，配制1000ml培養基的配方中含有：

酵母浸出粉5～8g；

牛肉粉6～10g；

酪蛋白胨6～10g；

瓊脂15～20g；

葡萄糖3～5g；

氯化鈉5～5.5g；

酵母鋅0.01～0.05g；

磷酸二氫鈉1～3g；

γ-羥基精氨酸0.1～0.5g；

N-乙酰-D-葡萄糖胺0.01～0.05g；

桿菌肽0.001～0.003g；

光谷甘肽0.1～0.5g；

無菌馬血蛋白20～50g；

蒸餾水加至1000ml。

其中：所述的牛肉粉、酪蛋白胨、葡萄糖提供碳源、氮源，酵母浸出粉富含蛋白質、氨基酸、多肽、核苷酸、維生素、生長因子、微量元素等營養成分，為李斯特菌的繁殖和生長提供均衡的營養元素；氯化鈉維持均衡的滲透壓；瓊脂為培養基的凝固劑；酵母鋅為營養劑，發明人發現，在培養基中加入一定濃度的鋅離子，目標菌的生長狀態好于對照組，因此推論鋅離子有助于該菌的生長，同時母體酵母含微生物必需氨基酸含量豐富、配比合理，具有促進細菌繁殖的功效；磷酸二氫鈉為緩沖劑；N-乙酰基-D-葡萄糖胺是營養強化劑，基礎實驗證實，將同一李斯特菌菌株接種到2個TSA-YE培養基上，其中一個TSA-YE配方中加入N-乙酰-D-葡萄糖胺0.05g/L，37℃下大氣條件下培養，48小時后觀察菌株，發現添加N-乙酰-D-葡萄糖胺的TSA-YE培養基有小的李斯特菌菌落，沒有添加N-乙酰-D-葡萄糖胺的TSA-YE培養基未發現李斯特菌菌落，N-乙酰-D-葡萄糖胺促進細胞生長、分化，是李斯特菌的生長因子；桿菌肽（Bacitracin），實驗室研究表明桿菌肽可以抑制革蘭陽性細菌和陰性球菌、肺炎雙球菌、葡萄球菌、淋球菌、腦膜炎雙球菌等雜菌的生長，但該濃度下由于對李斯特菌屬無抗菌抑菌作用，因此提高了李斯特菌的分離率。γ-羥基精氨酸為激活劑，可以促進李斯特菌對礦物質的攝取；無菌馬血蛋白提供能量環境。