[發(fā)明專利]一種生物表面活性劑強化植物—微生物共生體系的方法及其在原位修復鈾污染土壤中的應用有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201610065616.6 | 申請日: | 2016-02-01 |
| 公開(公告)號: | CN105689375B | 公開(公告)日: | 2019-01-18 |
| 發(fā)明(設計)人: | 肖方竹;彭國文;符建文;石志科;余麗梅;蒲移秋 | 申請(專利權)人: | 南華大學 |
| 主分類號: | B09C1/00 | 分類號: | B09C1/00;B09C1/10 |
| 代理公司: | 湖南省國防科技工業(yè)局專利中心 43102 | 代理人: | 馮青 |
| 地址: | 421001 湖南*** | 國省代碼: | 湖南;43 |
| 權利要求書: | 查看更多 | 說明書: | 查看更多 |
| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | 一種 生物 表面活性劑 強化 植物 微生物 共生 體系 方法 及其 原位 修復 污染 土壤 中的 | ||
1.一種生物表面活性劑強化植物—微生物共生體系的方法,其特征在于,以無鈾污染土壤、蛭石、泥炭土為培養(yǎng)基質(zhì),以蓖麻為土壤宿主植物,以叢枝菌根為接種微生物,首先利用育苗裝置培養(yǎng)蓖麻幼苗,在填充有培養(yǎng)基質(zhì)的泡沫漂浮孔穴育苗盆中對蓖麻種子進行叢枝菌根真菌接種,形成蓖麻幼苗—菌根真菌共生體系,再使用自制的生物表面活性劑菌株液體對蓖麻幼苗—菌根真菌共生體系進行強化,得到一種生物表面活性劑強化功能的蓖麻幼苗—菌根真菌共生體系,
具體步驟如下:
(1)培養(yǎng)基質(zhì)的制備
將無鈾污染土壤、蛭石和泥炭土按照一定質(zhì)量比進行混合,進行滅菌處理,得到所需的培養(yǎng)基質(zhì);
(2)生物表面活性劑菌株液體的制備
取10g處理后的堆肥樣品,置于裝有90mL無菌水的250mL三角瓶中振蕩25min后,靜止30min,得到土壤懸液,吸取2mL土壤懸浮液接種到富集培養(yǎng)基中,放入溫度為25℃、轉(zhuǎn)速為220r/min的恒溫培養(yǎng)箱中進行振蕩培養(yǎng)5d,吸取上述1mL富集培養(yǎng)液接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中,放入溫度為30℃、轉(zhuǎn)速為220r/min的恒溫培養(yǎng)箱中進行振蕩培養(yǎng),直至觀測到乳化現(xiàn)象,取1mL稀釋至10-3之后,以該稀釋發(fā)酵液1mL涂布于平板培養(yǎng)基上,于37℃恒溫靜置培養(yǎng)3d,挑選平板長勢良好的菌落進行劃線分離,按照上述方法進行再次發(fā)酵培養(yǎng)、馴化2次,即得到馴化后的菌株,將馴化后的菌株在富集培養(yǎng)液中繼續(xù)培養(yǎng)1d后,吸取1mL菌液按4.5%的接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中,調(diào)節(jié)pH值為6.5,在溫度為25℃、轉(zhuǎn)速為200r/min的恒溫培養(yǎng)箱中,繼續(xù)進行振蕩培養(yǎng)2d后,即得到生物表面活性劑菌株液體;
(3)蓖麻幼苗—菌根真菌共生體系的建立
將培養(yǎng)基質(zhì)裝入20cm×15cm規(guī)格的泡沫漂浮孔穴育苗盆中,每盆1kg,按照基質(zhì)質(zhì)量的15%澆水,待水分滲透均勻后,在基質(zhì)表層均勻噴灑一定質(zhì)量的叢枝菌根菌劑,使用10%H2O2對蓖麻種子浸泡25min,將其陰干后均勻撒種在培養(yǎng)基中,每盆4顆,然后,使用保鮮膜對泡沫漂浮孔穴育苗盆進行覆蓋,用小釘子在撒播蓖麻種子上方處的保鮮膜上扎孔4個,待蓖麻萌芽至單株含有80~100個菌根真菌孢子后,使泡沫漂浮孔穴育苗盆的下半部分浸入水中,待蓖麻種子出苗后間苗,每孔留苗1棵,并把水換成1/10強度的改良霍格蘭德營養(yǎng)液,3天后換成1/4強度的改良霍格蘭德營養(yǎng)液,2周后再更換一次1/4強度的改良霍格蘭德營養(yǎng)液,同時,每天對蓖麻萌芽使用含有生物表面活性劑菌株液體的水進行均勻噴淋,保持培養(yǎng)基質(zhì)的含水量60%,在室溫下培養(yǎng),繼續(xù)培育10d后,即得到生物表面活性劑強化功能的蓖麻幼苗—菌根真菌共生體系。
2.根據(jù)權利要求1所述的一種生物表面活性劑強化植物—微生物共生體系的方法,其特征在于,所述步驟(1)中使用的無鈾污染土壤質(zhì)量是1~2kg;蛭石質(zhì)量是1.5~4.5kg和泥炭土的質(zhì)量是0.5~0.8kg。
3.根據(jù)權利要求1所述的一種生物表面活性劑強化植物—微生物共生體系的方法,其特征在于,所述步驟(2)中使用的富集培養(yǎng)基組成是:氯化鉀1.5g;硫酸銨12g;氯化鈉1.2g;七水硫酸亞鐵3×10-5g;磷酸氫二鉀3.5g;三水磷酸氫二鉀0.65g;EDTA 1.1g;酵母浸膏0.6g;植物油5g;蒸餾水1000mL;
所述步驟(2)中使用的發(fā)酵培養(yǎng)基組成是:氯化鉀1.5g;硫酸銨12g;氯化鈉1.2g;七水硫酸亞鐵3×10-5g;磷酸氫二鉀3.5g;三水磷酸氫二鉀0.65g;硫酸鎂0.6g;氯化鈣0.25g;硫酸鋅0.3g;硫酸銅0.3g;EDTA 1.1g;酵母浸膏0.6g;植物油5g;蒸餾水1000mL;
所述步驟(2)中使用的平板培養(yǎng)基組成是:葡萄糖20g;蛋白胨5g;酵母浸膏0.25g;瓊脂20g;蒸餾水1000mL。
4.根據(jù)權利要求1所述的一種生物表面活性劑強化植物—微生物共生體系的方法,其特征在于,所述步驟(3)中使用的叢枝菌根菌劑為地表球囊霉、無梗囊霉、盾巨孢囊霉中的任意一種。
該專利技術資料僅供研究查看技術是否侵權等信息,商用須獲得專利權人授權。該專利全部權利屬于南華大學,未經(jīng)南華大學許可,擅自商用是侵權行為。如果您想購買此專利、獲得商業(yè)授權和技術合作,請聯(lián)系【客服】
本文鏈接:http://www.17sss.com.cn/pat/books/201610065616.6/1.html,轉(zhuǎn)載請聲明來源鉆瓜專利網(wǎng)。





