本發明涉及一種抗生素檢測方法，該方法具體包括(1)對蔬菜樣品進行預處理，得到抗生素提取液；(2)將抗生素提取液萃取得到抗生素洗脫液；(3)將抗生素洗脫液用旋轉蒸發儀蒸干，用初始流動相定容后過針頭濾器過濾獲得抗生素待測液；(4)將抗生素待測液通過優化的高效液相色譜串聯質譜法進行待測抗生素的檢測。本發明提供了一種用于檢測蔬菜樣品中11種抗生素殘留的方法，回收率高，檢測限低，克服了現有抗生素檢測方法成本高、檢測抗生素種類少和檢測限高的缺點與不足，為今后的抗生素環境行為和風險評估奠定了基礎。

技術領域

本發明涉及一種抗生素檢測方法，尤其涉及一種利用高效液相色譜串聯質譜同時檢測蔬菜中多種抗生素殘留的方法。

背景技術

抗生素是指由細菌、放線菌、真菌等微生物經培養而獲得的或是用化學合成法合成的結構相同或類似的具有殺滅或抑制病原微生物的物質。近年來大量的抗生素作為獸藥和飼料添加劑廣泛應用于畜禽養殖業中，在動物疾病防治、提高飼料轉化效率、促進動物生長發育方面發揮著重要作用。但是，通過口服或肌肉注射進入動物體內的抗生素并不能被完全吸收利用.其中以原形或初級代謝產物的形式隨尿或糞便排出體外的量約占用藥量的40％-90％。人用抗生素在污水廠進出水中含量均較高，致使流域水體受到抗生素污染。因此，抗生素大量且源源不斷地進入環境，造成環境種抗生素殘留以及耐藥細菌的傳播擴散，嚴重影響整個農業生態系統的安全。尤其是抗生素進入到蔬菜中，被人類食用后會直接危害人類健康。

建立同時檢測環境介質中多種抗生素的分析方法是研究其環境行為和生態環境風險的基礎。而蔬菜殘留的抗生素屬于痕量物質，現有方法多采用高效液相色譜儀技術進行研究，技術檢出限相對較高。并且目前的方法所能檢測的抗生素種類單一，對于多種抗生素的測定費用較高。因此建立一種能夠有效測定蔬菜樣品中多種抗生素殘留量的方法很有必要。

發明內容

本發明的目的是提供一種檢測蔬菜樣品中抗生素殘留的方法，即通過有效提取蔬菜中的抗生素，在優化的液相色譜和質譜條件下利用高效液相色譜串聯質譜法對蔬菜樣品中多種抗生素進行檢測，以克服現有抗生素檢測方法成本高、檢測抗生素種類少和檢測限高的的缺點與不足。

本發明的技術方案：(1)對蔬菜樣品進行預處理，得到抗生素提取液；(2)將抗生素提取液萃取得到抗生素洗脫液；(3)將抗生素洗脫液用旋轉蒸發儀蒸干，用1ml初始流動相定容后過針頭濾器過濾獲得抗生素待測液；(4)將抗生素待測液通過優化的高效液相色譜串聯質譜法進行待測抗生素的檢測；

在上述技術方案中，優選地，對蔬菜樣品進行預處理方法為將采集回的蔬菜樣品干燥后，稱取1g樣品用提取劑提取得抗生素提取液。

優選地，所述干燥方式為冷凍干燥。

優選地，所述的抗生素提取液的獲得方法為將1g樣品與10ml提取劑混合后在渦旋儀上震蕩30s，用超聲波清洗儀超聲15min，在轉速為8000rpm的條件下離心15min，倒出并保留上清液；再將沉淀與10ml提取劑混合后在渦旋儀上震蕩30s，用超聲波清洗儀超聲15min，在轉速為8000rpm的條件下離心15min，將兩次上清液合并得到抗生素提取液。

優選地，所述的提取劑為乙腈和鹽酸的混合溶液，乙腈∶鹽酸為125∶4(v/v)。

在上述技術方案中，優選地，抗生素洗脫液的獲得方法為將抗生素提取液通過0.45μm的尼龍濾膜，將過膜后提取液使用旋轉蒸發儀濃縮至3-5ml。將濃縮后的提取液通過活化后的HLB柱進行富集，用超純水淋洗HLB柱去除部分雜質，并抽干5min，再用洗脫劑洗脫HLB柱獲得抗生素洗脫液。

優選地，所述的HLB柱容積為6ml。

優選地，所述的HLB柱活化方法為先用5ml甲醇自然過柱，再用10ml去離子水分兩次自然過柱。

優選地，所述的提取液通過HLB柱時流速為1ml/min。