[發明專利]產多糖絮凝劑的地衣芽孢桿菌基因工程菌及其構建方法有效
| 申請號： | 201610028296.7 | 申請日： | 2016-01-15 |
| 公開（公告）號： | CN105624080B | 公開（公告）日： | 2019-02-05 |
| 發明（設計）人： | 何寧;陳震;余文成;王遠鵬;李清彪;沈亮 | 申請（專利權）人： | 廈門大學 |
| 主分類號： | C12N1/21 | 分類號： | C12N1/21;C12N15/54;C12N15/75;C12N15/66;C12P19/04;C12R1/10 |
| 代理公司： | 廈門南強之路專利事務所(普通合伙) 35200 | 代理人： | 馬應森 |
| 地址： | 361005 *** | 國省代碼： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 高產 多糖 絮凝 地衣 芽孢 桿菌 基因工程 及其 構建 方法 | ||
1.產多糖絮凝劑的地衣芽孢桿菌基因工程菌HN301-1，其特征在于是在產胞外多糖的地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis)中過表達epsDEF基因的基因工程菌；所述地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis)已于2009年01月14日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏中心登記入冊編號為CGMCC No.2876；所述epsDEF基因的核苷酸序列如序列表中SEQ ID No：1所示。
2.制備如權利要求1所述產多糖絮凝劑的地衣芽孢桿菌基因工程菌HN301-1的方法，其特征在于其具體步驟如下：
將所述epsDEF基因克隆到表達載體上獲得重組表達載體，將所得重組表達載體通過電轉化的方法導入到地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis)CGMCC No.2876中即獲得產多糖絮凝劑的基因工程菌HN301-1。
3.多糖絮凝劑的制備方法，其特征在于其具體步驟如下：
將權利要求1所述產多糖絮凝劑的地衣芽孢桿菌基因工程菌HN301-1發酵培養，收集發酵液，提純，即得多糖絮凝劑。
4.如權利要求3所述多糖絮凝劑的制備方法，其特征在于所述發酵培養的溫度為30～40℃，發酵培養的時間為48～60h。
5.如權利要求4所述多糖絮凝劑的制備方法，其特征在于所述發酵培養的溫度為35～40℃，發酵培養的時間為50～60h。
6.如權利要求5所述多糖絮凝劑的制備方法，其特征在于所述發酵培養的溫度為37℃，發酵培養的時間為56h。
7.如權利要求3所述多糖絮凝劑的制備方法，其特征在于所述提純的方法為：采用乙醇提取，離心速度為6000～8000rpm，離心時間為10～15min，離心溫度為4℃；所述乙醇的用量按體積比為發酵液的3倍。
8.如權利要求2所述產多糖絮凝劑的地衣芽孢桿菌基因工程菌HN301-1的方法，其特征在于所述重組表達載體的構建方法，是將所述epsDEF基因的核苷酸序列與表達載體pHY300PLK-PamyL-TTamyL質粒分別用限制性內切酶Kpn I和Spe I雙酶切，形成互補的粘性末端，分別純化后經T4DNA連接酶，形成重組表達載體，將所得的重組表達載體命名為pHY300-epsDEF。
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