本發(fā)明公開了一種測定酸性磷酸酶活性的方法，所述方法以L?抗壞血酸?2?磷酸作為酸性磷酸酶的催化底物，該底物在酸性磷酸酶的催化下水解為L?抗壞血酸，由于L?抗壞血酸可以將二價銅還原成一價銅，使得作為顯色探針的二價銅復(fù)合物轉(zhuǎn)化為深色的一價銅復(fù)合物，樣品中酸性磷酸酶活性越高，檢測液顏色變化越明顯，從而實現(xiàn)對酸性磷酸酶活性的半定量比色分析或用紫外?可見分光光度計進行定量檢測。通過本發(fā)明的方法，能檢測到0.48 mU·mL^?1的酸性磷酸酶，該方法靈敏度高，選擇性好，抗干擾能力強，重復(fù)性好，操作簡單，檢測時間短，成本低廉，可用于血清樣品中酸性磷酸酶活性的定量測定，為臨床樣品中酸性磷酸酶活性的檢測提供了一種快速、簡便、低廉、靈敏且性能穩(wěn)定的比色分析方法。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物分析技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種酸性磷酸酶活性的測定方法，尤其涉及一種基于比色分析快速測定酸性磷酸酶活性的方法。

背景技術(shù)

酸性磷酸酶(acid phosphatase,EC3.1.3.2,ACP)主要存在于巨噬細胞，定位于溶酶體內(nèi)，能催化磷酸單酯的水解反應(yīng)，產(chǎn)生無機磷酸和相應(yīng)的醇、酚或糖等。正常人血清中的ACP主要來源于前列腺、骨、肝、腎、脾、胰等組織，不論男女老幼，其含量大致相同。而前列腺疾病患者以及出現(xiàn)變形性骨髓炎、成骨不全、軟骨病、骨肉瘤、多發(fā)性骨髓瘤、原發(fā)性骨腫瘤、甲狀腺功能亢進、白血病、乳腺癌、心肌梗死、肝炎、肝硬化、膽囊炎、溶血性疾病和急性尿潴留等疾病時，血清中ACP的水平都會明顯升高。例如，臨床研究表明，在前列腺癌患者體內(nèi)，ACP水平明顯升高，其升高程度與前列腺癌的病情基本呈平行關(guān)系：當(dāng)病情好轉(zhuǎn)時，ACP水平逐步降低；再次升高時，常提示癌癥有復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移及預(yù)后不良。由此可見，如何簡單、有效、快速地測定ACP的活性，尤其是成分復(fù)雜的臨床組織和血清樣品中ACP的活性，對前列腺癌的輔助診斷，尤其對晚期前列腺癌的診斷、療效觀察及預(yù)后監(jiān)測具有重要的臨床價值和廣泛的應(yīng)用前景。

目前，測定ACP活性的方法主要包括以下幾種：(1)對硝基苯磷酸二鈉法：在酸性條件下，對硝基苯磷酸二鈉在ACP的催化作用下生成黃色的水溶性產(chǎn)物對硝基苯酚，該產(chǎn)物在405nm處有光吸收，通過測定其吸光度值，并與標準曲線進行比較，即可對ACP活性進行定量分析；(2)Gomori硝酸鉛法：在酸性條件下，以β-甘油磷酸鈉為底物，由ACP催化水解釋放出磷酸，磷酸與硝酸鉛結(jié)合形成無色的磷酸鉛沉淀，經(jīng)硫化胺處理形成棕黑色的硫化鉛沉淀；(3)磷酸苯二鈉法：在酸性條件下，ACP水解磷酸苯二鈉產(chǎn)生游離酚和磷酸，酚在堿性溶液中與4-氨基安替比林作用，經(jīng)鐵氰化鉀氧化形成紅色醌類化合物，其顏色深淺與ACP活性成正比。由此可見，在臨床檢測中，測定ACP活性的方法主要是基于溶液顏色的深淺變化(即溶液對光的選擇性吸收)來對物質(zhì)含量進行定量測定的比色分析法，這是由于比色分析法具有設(shè)備簡單、分析速度快、準確度高、重現(xiàn)性好和適合大批量樣品等優(yōu)良特性。然而，上述幾種方法都具有靈敏度低，抗干擾能力差，檢測過程繁瑣等缺點。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種酸性磷酸酶活性的測定方法，特別是一種基于比色分析測定酸性磷酸酶活性的方法。本發(fā)明的方法靈敏度高，選擇性好，抗干擾能力強，重復(fù)性好，操作簡單，檢測時間短，成本低廉，可用于血清樣品中酸性磷酸酶活性的定量測定，為臨床樣品中酸性磷酸酶活性的檢測提供了一種快速、簡便、低廉、靈敏且性能穩(wěn)定的比色分析方法。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)解決方案：

一種酸性磷酸酶活性的測定方法，包括以下步驟：將含有L-抗壞血酸-2-磷酸、二價銅離子、水溶性菲繞啉衍生物的緩沖液與待測酸性磷酸酶溶液孵育后，根據(jù)檢測液的顏色變化對樣品中酸性磷酸酶活性進行半定量比色檢測或用紫外-可見分光光度計進行定量檢測。

所述緩沖液為50mM pH5.7的甘氨酸-鹽酸緩沖液。

所述檢測液中，L-抗壞血酸-2-磷酸的濃度為50nM～100mM，優(yōu)選為10mM。