本發明公開了一種同時檢測番茄黃化曲葉病毒及伴隨的越南番茄黃化曲葉衛星DNAβ的方法及其專用引物組。本發明提供的引物組，由引物對TY和引物對β組成；所述引物對TY由名稱為TY?F的引物和名稱為TY?R的引物組成；所述TY?F為序列表中序列1所示的單鏈DNA；所述TY?R為序列表中序列2所示的單鏈DNA；所述引物對β由名稱為β?F的引物和名稱為β?R的引物組成；所述β?F為序列表中序列4所示的單鏈DNA；所述β?R為序列表中序列5所示的單鏈DNA。實驗證明，本發明提供的方法可準確的檢測番茄黃化曲葉病毒和/或越南衛星DNAβ。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種同時檢測番茄黃化曲葉病毒及伴隨的越南番茄黃化曲葉衛星DNAβ的方法及其專用引物組。

背景技術

雙生病毒(Geminivirus)是一類具有孿生顆粒形態的單鏈環狀植物DNA病毒，在世界范圍內廣泛發生，并已在多種作物上造成毀滅性危害。自20世紀90年代起，在中國的云南、廣西、廣東和福建等南方各省(區)該病毒病害危害日趨嚴重。番茄黃化曲葉病毒(Tomato yellow leaf curl virus，TYLCV)和中國番木瓜曲葉病毒(Papaya leaf curlChina virus，PaLCuCNV)都屬于雙生病毒科(Geminiviridae)菜豆金色花葉病毒屬(Begomovirus)成員，番茄黃化曲葉病毒于20世紀50年代末始發于以色列，目前已在全世界40多個國家和地區大面積暴發，自20世紀90年代傳入我國以來，由南向北、自東向西迅速全國性蔓延，已在臺灣、廣東、廣西、浙江、江蘇、上海、云南、四川、陜西、山東、安徽、河北、天津和北京等20多個番茄主產區大范圍發生，特別是對我國北方秋茬保護地和南方露地番茄生產造成了極其嚴重的損失。

雙生病毒分為四個屬，玉米線條病毒屬、甜菜曲頂病毒屬、番茄偽曲頂病毒屬和菜豆金色花葉病毒屬。菜豆金色花葉病毒屬多數為雙組份基因組，即DNAA和DNAB。少數為單組份基因組，其基因組結構只有DNAA。有些單組份菜豆金色花葉病毒屬病毒成員常伴隨有其它小分子衛星DNA，包括衛星DNAβ及衛星DNAα等，被伴隨的這些菜豆金色花葉病毒屬病毒稱為輔助病毒，DNAβ已被證明為致病因子，能夠影響輔助病毒在寄主中的積累，又是引起典型癥狀不可缺少的因子，它與輔助病毒之間沒有序列同源性，并且必須依賴于輔助病毒進行復制、包裹和移動。在田間自然發病的植株中，這些單組份雙生病毒常與其伴隨的衛星DNA形成病害復合體，有的伴隨一種衛星DNA，有的伴隨兩種，例如雙生病毒/DNAβ病害復合體、雙生病毒/DNAα病害復合體、雙生病毒/DNAβ/DNAα病害復合體等。

番茄黃化曲葉病毒屬于菜豆金色花葉病毒屬病毒，是一種單組份雙生病毒。番茄植株感染番茄黃化曲葉病毒病后，初期主要表現為生長遲緩或停滯，植株節間變短，植株明顯矮化，葉片變小變厚；葉質脆硬，葉片有褶皺、向上卷曲，葉片邊緣至葉脈區域黃化，植株上部葉片癥狀比較典型，下部老葉癥狀不明顯。由于番茄黃化曲葉病毒和越南衛星DNAβ有潛在的致病力增強的威脅，且復合侵染的產區正在擴大，開發能同時檢測兩種成分的特異、簡便和靈敏的方法對這種病害的新疫情的早期預警和及時防控具有現實意義。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種同時檢測番茄黃化曲葉病毒和/或越南衛星DNAβ的方法。

為解決上述問題，本發明首先提供了引物組。

本發明所提供的引物組，由引物對TY和引物對β組成；

所述引物對TY由名稱為TY-F的引物和名稱為TY-R的引物組成；所述TY-F為序列表中序列1所示的單鏈DNA；所述TY-R為序列表中序列2所示的單鏈DNA；

所述引物對β由名稱為β-F的引物和名稱為β-R的引物組成；所述β-F為序列表中序列4所示的單鏈DNA；所述β-R為序列表中序列5所示的單鏈DNA。

所述引物對TY也屬于本發明的保護范圍。